| 符号说明 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-22页 |
| 1.1 伤害胁迫与其他胁迫之间的关系 | 第12-15页 |
| 1.1.1 伤害胁迫与病原体响应之间的互作 | 第12-13页 |
| 1.1.2 伤害胁迫与非生物胁迫之间的互作 | 第13-14页 |
| 1.1.3 伤害胁迫与激素信号途径之间的互作 | 第14-15页 |
| 1.2 病害对植物的危害及相关信号途径 | 第15-17页 |
| 1.3 WRKY转录因子 | 第17-20页 |
| 1.4 本实验的目的和意义 | 第20-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 质粒和菌株 | 第22页 |
| 2.1.3 各种生化试剂和酶 | 第22页 |
| 2.1.4 序列测定 | 第22页 |
| 2.1.5 PCR引物 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-39页 |
| 2.2.1 棉花幼苗的养育和处理 | 第23-24页 |
| 2.2.2 植物总RNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.2.1 利用CTAB法提取棉花总RNA | 第24-25页 |
| 2.2.2.2 利用Trizol法提取烟草总RNA | 第25页 |
| 2.2.3 RNA中基因组DNA的去除 | 第25页 |
| 2.2.4 cDNA第一链的合成 | 第25-26页 |
| 2.2.5 cDNA纯化和加尾反应(5'RACE) | 第26页 |
| 2.2.5.1 cDNA的纯化 | 第26页 |
| 2.2.5.2 cDNA 5'末端加尾反应 | 第26页 |
| 2.2.6 电泳后目的片段的回收 | 第26-27页 |
| 2.2.7 连接目的片段和克隆载体 | 第27页 |
| 2.2.8 大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第27-28页 |
| 2.2.8.1 制备大肠杆菌感受态细胞 | 第27-28页 |
| 2.2.8.2 转化大肠杆菌感受态细胞 | 第28页 |
| 2.2.9 大肠杆菌微量质粒DNA提取 | 第28页 |
| 2.2.10 酶切鉴定重组质粒 | 第28-29页 |
| 2.2.11 DNA序列测定 | 第29页 |
| 2.2.12 cDNA全长序列的获得 | 第29-30页 |
| 2.2.12.1 中间片段的PCR扩增 | 第29-30页 |
| 2.2.12.2 5'RACE和3'RACE分别获得5'端和3'端序列 | 第30页 |
| 2.2.12.3 cDNA全长序列的获得 | 第30页 |
| 2.2.13 植物基因组DNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.2.13.1 CTAB法提取棉花基因组DNA | 第30页 |
| 2.2.13.2 植物基因组DNA的纯化 | 第30-31页 |
| 2.2.13.3 小量法提取本生烟基因组DNA | 第31页 |
| 2.2.14 全长基因组序列的获得 | 第31-32页 |
| 2.2.15 荧光实时定量PCR | 第32-33页 |
| 2.2.16 基因枪轰击法基因瞬时表达 | 第33-34页 |
| 2.2.16.1 制备融合目的基因的GFP表达载体 | 第33页 |
| 2.2.16.2 准备基因枪微弹 | 第33-34页 |
| 2.2.16.3 基因枪轰击法转化 | 第34页 |
| 2.2.17 植物表达载体的构建、转化及转化植株鉴定 | 第34-37页 |
| 2.2.17.1 制备农杆菌感受态细胞 | 第34-35页 |
| 2.2.17.2 植物表达载体的构建和转化农杆菌感受态细胞 | 第35页 |
| 2.2.17.3 农杆菌介导转化烟草 | 第35-36页 |
| 2.2.17.4 转基因本生烟的鉴定 | 第36-37页 |
| 2.2.18 酵母双杂交和双分子荧光互补实验 | 第37页 |
| 2.2.19 网络资源及数据库 | 第37-38页 |
| 2.2.20 生物学软件 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-57页 |
| 3.1 棉花GhWRKY40基因的分离 | 第39-40页 |
| 3.1.1 GhWRKY40中间片段的分离 | 第39页 |
| 3.1.2 GhWRKY40的5'片段的分离 | 第39页 |
| 3.1.3 GhWRKY40的3'片段的分离 | 第39-40页 |
| 3.1.4 GhWRKY40全长cDNA的分离 | 第40页 |
| 3.2 GhWRKY40的序列分析 | 第40-45页 |
| 3.2.1 GhWRKY40的全长cDNA序列分析 | 第40-41页 |
| 3.2.2 GhWRKY40蛋白序列分析 | 第41-42页 |
| 3.2.3 GhWRKY40基因组序列分析 | 第42-44页 |
| 3.2.4 GhWRKY40启动子序列的分离与序列分析 | 第44-45页 |
| 3.3 GhWRKY40的亚细胞定位分析 | 第45-46页 |
| 3.4 GhWRKY40基因的转录活性分析 | 第46-47页 |
| 3.5 GhWRKY40基因的表达特性分析 | 第47-48页 |
| 3.6 GhWRKY40过表达烟草植株的获得和鉴定 | 第48-51页 |
| 3.6.1 植物表达载体的构建 | 第48-49页 |
| 3.6.2 过表达GhWRKY40本生烟的获得 | 第49-50页 |
| 3.6.3 转基因植株的鉴定 | 第50-51页 |
| 3.7 GhWRKY40过表达植株的伤害胁迫分析 | 第51-53页 |
| 3.7.1 伤害胁迫下ROS的检测 | 第51-52页 |
| 3.7.2 伤害胁迫相关基因的表达模式 | 第52-53页 |
| 3.8 GhWRKY40过表达植株的抗病分析 | 第53-55页 |
| 3.8.1 GhWRKY40过表达植株对青枯细菌侵染表现为敏感性 | 第53-54页 |
| 3.8.2 抗病相关基因的表达模式 | 第54-55页 |
| 3.9 GhWRKY40与GhMPK6a、GhMPK20互作关系 | 第55-57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| 5 小结 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第70页 |
