| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号表 | 第7-8页 |
| 主要仪器 | 第8-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-30页 |
| 1 胚胎干细胞体外诱导分化为生殖细胞的研究进展 | 第13-19页 |
| 1.1 胚胎干细胞 | 第13-14页 |
| 1.2 生殖细胞 | 第14-16页 |
| 1.3 胚胎干细胞向生殖细胞的诱导分化 | 第16-19页 |
| 1.3.1 胚胎干细胞向生殖细胞诱导分化的方法 | 第16-17页 |
| 1.3.2 胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的诱导 | 第17页 |
| 1.3.3 胚胎干细胞向雌性生殖细胞分化的诱导 | 第17-18页 |
| 1.3.4 胚胎干细胞向生殖细胞诱导分化的应用前景 | 第18-19页 |
| 2 DAZL基因的研究进展 | 第19-20页 |
| 3 真核基因启动子与基因表达 | 第20-22页 |
| 3.1 真核生物启动子的结构 | 第20-21页 |
| 3.2 启动子与基因表达调控 | 第21-22页 |
| 3.3 启动子功能的验证方法 | 第22页 |
| 4 小鼠和鸡作为模式动物的特点 | 第22-24页 |
| 参考文献 | 第24-30页 |
| 第二章 鸡DAZL基因核心启动子的鉴定 | 第30-49页 |
| 1 材料与方法 | 第31-41页 |
| 1.1 材料与试剂 | 第31-33页 |
| 1.1.1 实验材料 | 第31页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第31页 |
| 1.1.3 引物设计与合成 | 第31-33页 |
| 1.1.4 常用试剂配制 | 第33页 |
| 1.2 方法 | 第33-41页 |
| 1.2.1 苏禽黄鸡睾丸组织基因组DNA的提取 | 第33-34页 |
| 1.2.2 真核表达载体pDAZL-EGFP的构建 | 第34-37页 |
| 1.2.3 启动子缺失载体pLinker-EGFP的构建 | 第37-38页 |
| 1.2.4 苏禽黄鸡DAZL基因启动子活性定性分析 | 第38-39页 |
| 1.2.5 DAZL基因核心启动子的鉴定 | 第39-40页 |
| 1.2.6 统计学处理 | 第40-41页 |
| 2 结果 | 第41-45页 |
| 2.1 真核表达载体pDAZL-EGFP的构建 | 第41页 |
| 2.2 启动子缺失载体pLinker-EGFP的构建 | 第41-42页 |
| 2.3 苏禽黄鸡DAZL基因启动子活性定性分析 | 第42-43页 |
| 2.4 DAZL基因核心启动子的鉴定 | 第43-45页 |
| 2.4.1 鸡DAZL基因启动子不同长度缺失片段的PCR扩增 | 第43页 |
| 2.4.2 系列缺失载体的构建 | 第43-44页 |
| 2.4.3 鸡DAZL基因启动子核心区域鉴定 | 第44-45页 |
| 3 讨论 | 第45-46页 |
| 4 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-49页 |
| 第三章 鸡DAZL基因DNA甲基化初步分析及诱导剂筛选 | 第49-63页 |
| 1 材料与方法 | 第51-55页 |
| 1.1 材料与试剂 | 第51-52页 |
| 1.1.1 实验材料 | 第51页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第51页 |
| 1.1.3 引物设计与合成 | 第51-52页 |
| 1.1.4 常用试剂配制 | 第52页 |
| 1.2 方法 | 第52-55页 |
| 1.2.1 DNA甲基化状态对DAZL基因启动子活性的影响 | 第52-54页 |
| 1.2.2 睾丸组织提取液的制备 | 第54页 |
| 1.2.3 诱导剂处理转染后的细胞 | 第54页 |
| 1.2.4 双荧光素酶活性检测 | 第54-55页 |
| 1.2.5 统计学处理 | 第55页 |
| 2 结果 | 第55-59页 |
| 2.1 DNA甲基化状态对DAZL基因启动子活性的影响 | 第55-57页 |
| 2.1.1 生物信息学预测DAZL基因启动子区域CpG岛 | 第55页 |
| 2.1.2 DAZL基因启动子区域甲基化位点定性分析 | 第55-56页 |
| 2.1.3 重亚硫酸盐测序 | 第56-57页 |
| 2.1.4 DNA甲基化对鸡DAZL基因启动子活性的影响 | 第57页 |
| 2.2 鸡DAZL基因启动子诱导剂筛选 | 第57-59页 |
| 3 讨论 | 第59-60页 |
| 4 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-63页 |
| 第四章 DAZL基因启动子诱导剂的通用性验证 | 第63-78页 |
| 1 材料与方法 | 第64-67页 |
| 1.1 材料与试剂 | 第64-66页 |
| 1.1.1 实验材料 | 第64页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第64页 |
| 1.1.3 引物设计与合成 | 第64-66页 |
| 1.1.4 常用试剂配制 | 第66页 |
| 1.2 方法 | 第66-67页 |
| 1.2.1 小鼠DAZL基因启动子活性定性分析 | 第66页 |
| 1.2.2 小鼠DAZL基因启动子核心区域鉴定 | 第66页 |
| 1.2.3 小鼠DAZL基因启动子甲基化初步分析 | 第66页 |
| 1.2.4 DAZL基因启动子诱导剂作用效果验证 | 第66-67页 |
| 2 结果 | 第67-75页 |
| 2.1 小鼠DAZL基因启动子活性定性分析 | 第67-68页 |
| 2.1.1 真核表达载体pmDAZL-EGFP的构建 | 第67-68页 |
| 2.1.2 小鼠DAZL基因启动子活性定性分析 | 第68页 |
| 2.2 小鼠DAZL基因启动子核心区域鉴定 | 第68-70页 |
| 2.2.1 DAZL基因启动子5′端不同长度缺失片段的PCR扩增 | 第68-69页 |
| 2.2.2 系列缺失载体的构建 | 第69-70页 |
| 2.2.3 小鼠DAZL基因启动子活性检测 | 第70页 |
| 2.3 小鼠DAZL基因启动子甲基化初步分析 | 第70-73页 |
| 2.3.1 小鼠DAZL基因启动子CpG岛区域预测 | 第70-71页 |
| 2.3.2 小鼠DAZL基因启动子区域甲基化位点定性分析 | 第71-72页 |
| 2.3.3 重亚硫酸盐测序 | 第72页 |
| 2.3.4 DNA甲基化对小鼠DAZL基因启动子活性的影响 | 第72-73页 |
| 2.4 DAZL基因启动子诱导剂作用效果验证 | 第73-75页 |
| 3 讨论 | 第75-76页 |
| 4 结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-80页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第80-81页 |
