| CONTENTS | 第5-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第11-20页 |
| 1.1 苏云金芽胞杆菌概述 | 第11-14页 |
| 1.1.1 苏云金芽胞杆菌的特点 | 第11-12页 |
| 1.1.2 苏云金芽胞杆菌晶体蛋白和芽胞的产生 | 第12-13页 |
| 1.1.3 cry基因的转录调控 | 第13-14页 |
| 1.2 σ~(54)因子概述 | 第14-17页 |
| 1.2.1 σ~(54)和σ~(70)家族的区别和特点 | 第14-15页 |
| 1.2.2 σ~(54) 因子的结构特点 | 第15-16页 |
| 1.2.3 σ~(54)因子的作用机制 | 第16页 |
| 1.2.4 σ~(54)因子的功能及其调控的代谢途径 | 第16-17页 |
| 1.3 增强子结合蛋白概述 | 第17-18页 |
| 1.3.1 增强子结合蛋白的结构与功能 | 第17-18页 |
| 1.3.2 Bt中的bEBPs | 第18页 |
| 1.4 立题依据与目的意义 | 第18-20页 |
| 1.4.1 立题依据 | 第18-19页 |
| 1.4.2 目的意义 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-34页 |
| 2.1 材料 | 第20-25页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第20-21页 |
| 2.1.2 培养基与抗生素 | 第21页 |
| 2.1.3 酶与生化试剂 | 第21页 |
| 2.1.4 引物序列 | 第21-24页 |
| 2.1.5 溶液和缓冲液 | 第24-25页 |
| 2.2 实验仪器 | 第25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-34页 |
| 2.3.1 模板制备 | 第25-26页 |
| 2.3.2 目的片段的扩增 | 第26页 |
| 2.3.3 重叠PCR | 第26-27页 |
| 2.3.4 酶切反应 | 第27页 |
| 2.3.5 琼脂糖凝胶电泳 | 第27页 |
| 2.3.6 大肠杆菌质粒提取 | 第27页 |
| 2.3.7 DNA的回收 | 第27页 |
| 2.3.8 DNA片段的连接 | 第27页 |
| 2.3.9 大肠杆菌热击感受态细胞的制备及转化 | 第27-28页 |
| 2.3.10 苏云金芽胞杆菌电击感受态细胞的制备与转化 | 第28页 |
| 2.3.11 序列测定及分析 | 第28页 |
| 2.3.12 RT-PCR分析 | 第28-30页 |
| 2.3.13 同源重组突变体的筛选 | 第30-31页 |
| 2.3.14 突变体生长曲线测定 | 第31页 |
| 2.3.15 β-半乳糖苷酶活性分析 | 第31页 |
| 2.3.16 运动能力 | 第31-32页 |
| 2.3.17 芽胞形成率 | 第32页 |
| 2.3.18 蛋白定量和SDS-PAGE电泳 | 第32页 |
| 2.3.19 光学显微镜观察 | 第32-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-59页 |
| 3.1 bEBPs所在基因簇的序列分析 | 第34页 |
| 3.2 bEBPs基因插入失活突变载体的构建及筛选 | 第34-50页 |
| 3.2.1 prdR基因插入失活突变载体的构建及筛选 | 第36-39页 |
| 3.2.2 rocR基因插入失活突变载体的构建 | 第39-41页 |
| 3.2.3 acoR基因插入失活突变载体的构建 | 第41-44页 |
| 3.2.4 bkdR基因插入失活突变载体的构建 | 第44-47页 |
| 3.2.5 levR基因插入失活突变载体的构建 | 第47-50页 |
| 3.3 受bEBPs调控的启动子活性分析 | 第50-53页 |
| 3.4 bEBPs突变体的表型分析 | 第53-56页 |
| 3.4.1 bEBPs突变体的生长比较 | 第53页 |
| 3.4.2 bEBPs突变体的运动能力比较 | 第53-54页 |
| 3.4.3 bEBPs突变体的芽胞形成率分析 | 第54-55页 |
| 3.4.4 bEBPs突变体的蛋白产量 | 第55-56页 |
| 3.5 bkd基因簇的转录调控 | 第56-59页 |
| 3.5.1 bkd基因簇的序列分析和RT-PCR分析 | 第56-57页 |
| 3.5.2 bkdR突变体的互补菌株和过表达菌株的构建 | 第57-58页 |
| 3.5.3 野生菌株、突变体、过表达菌株和互补菌株的运动能力比较 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-62页 |
| 4.1 sigL对Bt生长代谢的重要性 | 第59页 |
| 4.2 Bt中bEBPs可能参与的代谢途径 | 第59-62页 |
| 5 结论 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第71页 |
