| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-17页 |
| 1.1 常见与泄殖腔相关的人类疾病 | 第11页 |
| 1.2 小鼠泄殖腔的发育过程及相关信号通路 | 第11-12页 |
| 1.3 斑马鱼作为模式生物研究泄殖腔发育的优势 | 第12页 |
| 1.4 斑马鱼泄殖腔发育的基本过程 | 第12-13页 |
| 1.5 斑马鱼泄殖腔发育过程中的相关信号通路 | 第13-14页 |
| 1.5.1 BMP信号通路 | 第13页 |
| 1.5.2 其他信号通路 | 第13-14页 |
| 1.6 导致斑马鱼泄殖腔缺陷的其他因素 | 第14页 |
| 1.7 Hsp70热激活蛋白 | 第14-15页 |
| 1.8 本项目的立项依据、目的和意义 | 第15-17页 |
| 第二部分 材料和方法 | 第17-37页 |
| 2.1 实验动物 | 第17页 |
| 2.2 仪器、试剂和耗材 | 第17-18页 |
| 2.3 试剂配方 | 第18-22页 |
| 2.3.1 LB培养基 | 第18页 |
| 2.3.2 原位杂交相关溶液 | 第18-21页 |
| 2.3.3 其他溶液 | 第21-22页 |
| 2.4 质粒和菌株 | 第22页 |
| 2.5 E.coli(大肠杆菌)化学感受态细胞的制备 | 第22页 |
| 2.6 Taq DNA polymerase的制备与提纯 | 第22-23页 |
| 2.7 斑马鱼total RNA的提取和cDNA的合成 | 第23-24页 |
| 2.7.1 斑马鱼total RNA的提取 | 第23页 |
| 2.7.2 斑马鱼cDNA的合成 | 第23-24页 |
| 2.8 目的基因的扩增,重组和转化 | 第24-27页 |
| 2.8.1 目的基因的扩增—聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction) | 第24页 |
| 2.8.2 PCR产物的纯化 | 第24-25页 |
| 2.8.3 目的基因的重组 | 第25-26页 |
| 2.8.4 重组质粒的转化(化学转化法) | 第26-27页 |
| 2.9 重组质粒的筛选、纯化和鉴定 | 第27-29页 |
| 2.9.1 重组质粒的筛选 | 第27-28页 |
| 2.9.2 重组质粒的纯化 | 第28页 |
| 2.9.3 重组质粒的鉴定 | 第28-29页 |
| 2.10 反义RNA探针的制备 | 第29-32页 |
| 2.10.1 制备反义RNA探针模板的线性化 | 第29-30页 |
| 2.10.2 线性化模板的纯化 | 第30-31页 |
| 2.10.3 反应RNA探针的合成和纯化 | 第31-32页 |
| 2.11 全胚RNA原位杂交(Whole Mount RNA in situ hybridization) | 第32-34页 |
| 2.11.1 胚胎的收集及固定 | 第32页 |
| 2.11.2 原位杂交 | 第32-34页 |
| 2.12 显微注射 | 第34-37页 |
| 2.12.1 注射前的准备工作 | 第34页 |
| 2.12.2 注射当天的工作 | 第34-37页 |
| 第三部分 实验结果与讨论 | 第37-55页 |
| 3.1 斑马鱼泄殖腔不同时期的发育图(DIC效果) | 第37-38页 |
| 3.2 泄殖腔相关基因在泄殖腔发育过程中的表达图谱 | 第38-40页 |
| 3.2.1 相关基因的克隆及反义RNA的制备 | 第38-39页 |
| 3.2.2 原位杂交检测不同基因在泄殖腔处的表达情况 | 第39-40页 |
| 3.3 BMP信号上调或下调后泄殖腔发育的表型分析 | 第40-44页 |
| 3.3.1 Tg(hsp70：bmp2b)转基因胚胎最佳热激时间的确定 | 第40-42页 |
| 3.3.2 BMP信号变化后泄殖腔缺陷表型分析 | 第42-44页 |
| 3.3.3 BMP信号变化后aqp3a在泄殖腔处的信号表达情况 | 第44页 |
| 3.4 不同BMP转基因胚胎排泄功能研究 | 第44-45页 |
| 3.5 肾管和内胚层早期探针在不同BMP转基因胚胎中的表达情况 | 第45-46页 |
| 3.6 BMP信号变化后AO染色阳性细胞的变化 | 第46-50页 |
| 3.6.1 野生型斑马鱼胚胎中的AO染色阳性细胞变化情况 | 第46-47页 |
| 3.6.2 BMP信号变化后AO染色阳性细胞的变化 | 第47-49页 |
| 3.6.3 注射bcl2l mRNA抑制凋亡后泄殖腔的发育 | 第49-50页 |
| 3.7 讨论与分析 | 第50-55页 |
| 3.7.1 斑马鱼泄殖腔的发育需要经历两次向外的开口 | 第50页 |
| 3.7.2 筛选获得两个泄殖腔重要分子标记基因hoxd13a和aqp3a | 第50-51页 |
| 3.7.3 Tg(hsp70：bmp2b)和Tg(hsp70：bmpDNR-GFP)热激后泄殖腔发育的表型及排泄功能分析 | 第51-52页 |
| 3.7.4 Tg(hsp70：bmp2b)和Tg(hsp70：bmpDNR-FGP)两种转基因胚胎泄殖腔缺陷分析 | 第52-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
