| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 第一章 Cathepsin ba基因在斑马鱼胚胎发育早期的作用 | 第11-60页 |
| 前言 | 第11-17页 |
| 1.1 Cathespins家族介绍 | 第11-14页 |
| 1.2 Cathepsin B研究进展 | 第14-15页 |
| 1.3 斑马鱼应用于多种人类疾病研究 | 第15-17页 |
| 1 实验材料 | 第17-21页 |
| 1.1 实验动物 | 第17页 |
| 1.2 载体、菌株、工具酶和试剂盒 | 第17-18页 |
| 1.3 其他试剂 | 第18-21页 |
| 1.4 实验仪器 | 第21页 |
| 2 实验方法 | 第21-39页 |
| 2.1 利用CRISPR/Cas9技术获得斑马鱼cathepsin ba基因突变体 | 第21-31页 |
| 2.2 观察cathepsin ba基因突变体早期胚胎发育情况 | 第31页 |
| 2.3 RT-PCR与qPCR分析cathepsin ba在斑马鱼各发育时期中的表达 | 第31-35页 |
| 2.4 RT-PCR分析ctsba~(-/-)突变体中mRNA表达情况 | 第35-36页 |
| 2.5 原位杂交分析cathepsin ba在斑马鱼早期胚胎表达 | 第36-39页 |
| 2.6 心脏标记基因原位杂交分析斑马鱼ctsba~(-/-)突变体心室发育 | 第39页 |
| 2.7 背腹轴标记基因原位杂交分析斑马鱼ctsba突变体背腹轴发育 | 第39页 |
| 2.8 利用三胚层标记基因原位杂交分析ctsba~(-/-)突变体胚层发育 | 第39页 |
| 3 结果与讨论 | 第39-57页 |
| 3.1 利用CRISPR/Cas9技术筛选获得cathepsin ba突变体 | 第39-45页 |
| 3.2 cathepsin ba纯合突变体早期发育存在广泛畸形及隐性致死效应 | 第45-48页 |
| 3.3 RT-PCR结果显示ctsba~(-/-)突变体中发生NMD现象 | 第48页 |
| 3.4 RT-PCR与qPCR分析cathepsin ba基因在斑马鱼中呈现母源性及合子表达 | 第48-49页 |
| 3.5 原位杂交分析cathepsin ba基因在斑马鱼早期胚胎中泛表达 | 第49-50页 |
| 3.6 心脏标记基因原位杂交显示斑马鱼ctsba~(-/-)突变体心室发育无异常 | 第50-51页 |
| 3.7 背腹轴标记基因原位杂交表明斑马鱼ctsba~(-/-)突变体背部发育异常 | 第51-53页 |
| 3.8 三胚层标记基因原位杂交显示ctsba~(-/-)突变体各胚层发育异常 | 第53-57页 |
| 讨论 | 第57-60页 |
| 第二章 Cathepsin bb基因在斑马鱼胚胎发育早期的作用 | 第60-67页 |
| 前言 | 第60页 |
| 1 实验材料 | 第60-61页 |
| 1.1 实验动物 | 第60页 |
| 1.2 载体、菌株、工具酶和试剂盒 | 第60页 |
| 1.3 其他试剂 | 第60页 |
| 1.4 实验仪器 | 第60-61页 |
| 2 实验方法 | 第61-62页 |
| 2.1 利用CRISPR/Cas9技术获得斑马鱼cathepsin bb基因突变体 | 第61页 |
| 2.2 观察cathepsin bb基因突变体早期胚胎发育情况 | 第61页 |
| 2.3 RT-PCR分析cathepsin bb在斑马鱼各发育时期中的表达 | 第61页 |
| 2.4 RT-PCR分析cathepsin bb基因在斑马鱼各器官组织中的表达 | 第61-62页 |
| 3 结果与讨论 | 第62-66页 |
| 3.1 利用CRISPR/Cas9技术筛选获得cathepsin bb突变体 | 第62-65页 |
| 3.2 观察cathepsin bb基因突变体早期胚胎发育、成体正常 | 第65页 |
| 3.3 RT-PCR初步检测cathepsin bb基因早期各发育时期不表达 | 第65-66页 |
| 3.4 RT-PCR检测cathepsin bb基因在斑马鱼各组织器官中的表达情况 | 第66页 |
| 讨论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第72页 |
