| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11页 |
| 1 前言 | 第12-20页 |
| 1.1 乙烯的合成及信号转导途径 | 第12-16页 |
| 1.1.1 乙烯的合成途径 | 第12-13页 |
| 1.1.2 MAP蛋白激酶对乙烯的影响 | 第13-14页 |
| 1.1.3 乙烯信号转导途径 | 第14-15页 |
| 1.1.4 转录因子ERF的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2 乙烯对果实成熟的影响 | 第16-17页 |
| 1.3 Ca~(2+)对果实品质的影响 | 第17-18页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第18-20页 |
| 2 试验材料与方法 | 第20-30页 |
| 2.1 试验材料 | 第20页 |
| 2.2 试验方法 | 第20-30页 |
| 2.2.1 乙烯的测量 | 第20页 |
| 2.2.2 RNA的提取、检测与cDNA的合成 | 第20-21页 |
| 2.2.3 荧光定量PCR | 第21页 |
| 2.2.4 基因的克隆及载体构建 | 第21-23页 |
| 2.2.4.1 基因的克隆 | 第21-22页 |
| 2.2.4.2 PCR产物的回收与连接 | 第22页 |
| 2.2.4.3 载体的构建与大肠杆菌的转化 | 第22-23页 |
| 2.2.5 酵母双杂交实验 | 第23-24页 |
| 2.2.6 GST标签蛋白的表达与纯化 | 第24-25页 |
| 2.2.6.1 GST标签蛋白的表达 | 第24页 |
| 2.2.6.2 GST标签蛋白的纯化 | 第24-25页 |
| 2.2.7 His标签蛋白的表达与纯化 | 第25页 |
| 2.2.8 Pulldown实验 | 第25页 |
| 2.2.9 Westernblot检测 | 第25-26页 |
| 2.2.10 酵母单杂交实验 | 第26-27页 |
| 2.2.11 GUS活性的测定 | 第27-28页 |
| 2.2.11.1 农杆菌的注射烟草实验 | 第27页 |
| 2.2.11.2 GUS荧光活性的检测 | 第27-28页 |
| 2.2.11.2.1 烟草总蛋白的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.11.2.2 GUS表达水平的定量测定 | 第28页 |
| 2.2.12 凝胶阻滞(EMSA)试验 | 第28-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-42页 |
| 3.1 CaCl_2处理苹果果实后乙烯的变化分析 | 第30-32页 |
| 3.1.1 CaCl_2处理苹果果实后乙烯生成量变化分析 | 第30页 |
| 3.1.2 乙烯合成途径中关键基因MdACS1、MdACO1的表达分析 | 第30-31页 |
| 3.1.3 乙烯信号转导途径中转录因子的表达分析 | 第31-32页 |
| 3.2 MdERF5负调控MdACS1的启动子分析 | 第32-35页 |
| 3.2.1 MdERF5结合MdACS1的启动子的酵母单杂交试验 | 第33页 |
| 3.2.2 MdERF5结合MdACS1的启动子的EMSA试验 | 第33-34页 |
| 3.2.3 GUS报告基因试验验证MdERF5对MdACS1的调控模式 | 第34-35页 |
| 3.3 MdERF2与MdERF5的互作及对MdACS1的调控模式 | 第35-39页 |
| 3.3.1 MdERF2与MdERF5互作的酵母双杂交试验 | 第35-36页 |
| 3.3.2 分析MdERF2与MdERF5互作的Pulldown试验 | 第36-37页 |
| 3.3.3 MdERF2与MdERF5互作的区域分析 | 第37-38页 |
| 3.3.4 MdERF2与MdERF5互作对MdACS1启动子调控的影响 | 第38-39页 |
| 3.4 CaCl_2处理后对MAPK蛋白激酶的分析 | 第39-42页 |
| 3.4.1 MdERF5蛋白磷酸化位点分析 | 第39-40页 |
| 3.4.2 MdMPK1在果实成熟过程中的表达变化 | 第40页 |
| 3.4.3 MdERF5与MdMPK1的互作分析 | 第40-42页 |
| 4 讨论 | 第42-46页 |
| 4.1 外源钙对果实成熟的影响 | 第42页 |
| 4.2 CaCl_2处理对乙烯信号转导途径及相关基因的表达分析 | 第42-44页 |
| 4.3 CaCl_2处理后对MAPK激酶作用分析 | 第44-46页 |
| 5 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-55页 |
| 附录 | 第55-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
