| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-21页 |
| 1.1 苏云金素简介 | 第11-18页 |
| 1.1.1 苏云金素的性质 | 第11页 |
| 1.1.2 苏云金素产生菌及其杀虫机理 | 第11-12页 |
| 1.1.3 苏云金素发酵和检测研究进展 | 第12-15页 |
| 1.1.4 苏云金素合成基因簇研究进展 | 第15-18页 |
| 1.1.5 苏云金素的安全性评测 | 第18页 |
| 1.2 蛋白激酶研究进展 | 第18-20页 |
| 1.3 本课题的研究意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 菌株、质粒 | 第21-23页 |
| 2.1.2 培养基 | 第23页 |
| 2.1.3 试剂和仪器 | 第23-24页 |
| 2.1.3.1 试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.3.2 仪器 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-31页 |
| 2.2.1 DNA常规操作 | 第24-26页 |
| 2.2.1.1 苏云金芽胞杆菌总DNA的制备 | 第24-25页 |
| 2.2.1.2 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第25页 |
| 2.2.1.3 DNA的体外重组操作 | 第25页 |
| 2.2.1.4 大肠杆菌的常规转化 | 第25-26页 |
| 2.2.1.5 苏云金芽胞杆菌的电转化 | 第26页 |
| 2.2.1.6 PCR扩增 | 第26页 |
| 2.2.2 SDS-PAGE | 第26-27页 |
| 2.2.2.1 菌体蛋白样品的制备 | 第26-27页 |
| 2.2.2.2 SDS-PAGE凝胶的制备 | 第27页 |
| 2.2.2.3 电泳、染色及脱色 | 第27页 |
| 2.2.3 Tricine-SDS-PAGE | 第27页 |
| 2.2.4 苏云金素的分离纯化和检测 | 第27-28页 |
| 2.2.4.1 有机溶剂萃取法分离纯化苏云金素(用于HPLC检测) | 第27-28页 |
| 2.2.4.2 苏云金素的HPLC检测 | 第28页 |
| 2.2.4.3 Thu和前体物C的质谱检测 | 第28页 |
| 2.2.5 基因thuE的表达、纯化与活性检测 | 第28-29页 |
| 2.2.5.1 基因thuE的超量表达与纯化 | 第28页 |
| 2.2.5.2 表达基因thuE的重组质粒的构建 | 第28-29页 |
| 2.2.5.3 蛋白ThuE的超量表达和纯化 | 第29页 |
| 2.2.5.4 ThuE蛋白的活性检测 | 第29页 |
| 2.2.5.5 蛋白ThuE的特异性检测 | 第29页 |
| 2.2.6 苏云金芽胞杆菌膜蛋白的提取和检测 | 第29-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-46页 |
| 3.1 突变株CT-43-A3中基因thuE的功能互补 | 第31-35页 |
| 3.1.1 CT-43和突变株CT-43-A3表型检测 | 第31-32页 |
| 3.1.2 互补载体的构建 | 第32-33页 |
| 3.1.3 重组菌株的筛选和检测 | 第33-35页 |
| 3.2 基因thuE在大肠杆菌BL21中的表达和纯化 | 第35-37页 |
| 3.2.1 表达载体的构建 | 第35-36页 |
| 3.2.2 thuE基因的诱导表达 | 第36-37页 |
| 3.3 ThuE体外催化功能 | 第37-44页 |
| 3.3.1 ThuE前体物的确定 | 第37-40页 |
| 3.3.2 蛋白ThuE体外催化功能的确定 | 第40-42页 |
| 3.3.3 ThuE体外催化底物特异性的研究 | 第42-44页 |
| 3.4 CT-43与CT-43-A3膜蛋白的提取 | 第44-46页 |
| 4 讨论 | 第46-47页 |
| 5 总结 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 附录1 | 第54-55页 |
| 附录2 | 第55页 |
