| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-22页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征 | 第10-12页 |
| 1.1.1 PRRSV的分类 | 第10页 |
| 1.1.2 PRRSV的理化特性 | 第10-11页 |
| 1.1.3 PRRSV的抗原性 | 第11页 |
| 1.1.4 PRRSV的生物学特性 | 第11-12页 |
| 1.2 PRRSV分子生物学特征 | 第12-17页 |
| 1.2.1 PRRSV基因组的结构与功能 | 第12-13页 |
| 1.2.2 PRRSV的蛋白质 | 第13-16页 |
| 1.2.3 PRRSV的抗原性变异 | 第16-17页 |
| 1.2.4 PRRSV的毒力变异 | 第17页 |
| 1.3 PRRS的诊断研究 | 第17-22页 |
| 1.3.1 病毒分离 | 第17-18页 |
| 1.3.2 分子生物学检测方法 | 第18-19页 |
| 1.3.3 抗原检测 | 第19页 |
| 1.3.4 血清学试验检测抗体 | 第19-22页 |
| 第2章 研究目的和意义 | 第22-23页 |
| 第3章 材料与方法 | 第23-37页 |
| 3.1 试验材料 | 第23-27页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第23页 |
| 3.1.2 毒株、细胞与菌株 | 第23页 |
| 3.1.3 载体与质粒 | 第23-24页 |
| 3.1.4 工具酶及主要试剂 | 第24-25页 |
| 3.1.5 主要缓冲液与相关试剂及其配制 | 第25-27页 |
| 3.2 试验方法 | 第27-37页 |
| 3.2.1 RT-PCR扩增截去跨膜区序列的Nsp2基因片段 | 第27-28页 |
| 3.2.2 RT-PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第28页 |
| 3.2.3 PCR扩增产物或酶切产物回收与纯化 | 第28-29页 |
| 3.2.4 外源DNA片段与克隆质粒载体的连接反应 | 第29页 |
| 3.2.5 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第29页 |
| 3.2.6 连接产物的转化 | 第29页 |
| 3.2.7 质粒的制备与鉴定 | 第29-30页 |
| 3.2.8 Nsp2的原核表达 | 第30-31页 |
| 3.2.9 表达产物的提取 | 第31-32页 |
| 3.2.10 表达产物的Western blot检测 | 第32-33页 |
| 3.2.11 重组蛋白间接ELISA方法的建立 | 第33-35页 |
| 3.2.12 猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白Nsp2单克隆抗体的制备 | 第35-37页 |
| 第4章 结果与分析 | 第37-63页 |
| 4.1 猪繁殖与呼吸综合征病毒间接ELISA抗体检测方法的建立 | 第37-60页 |
| 4.1.1 截去跨膜区序列的Nsp2基因原核表达质粒的构建 | 第37-39页 |
| 4.1.2 截去跨膜区的Nsp2基因片段在大肠杆菌中的表达 | 第39-40页 |
| 4.1.3 Nsp2-ELISA、Nsp7-ELISA最佳抗原包被浓度与血清稀释度的确定 | 第40-42页 |
| 4.1.4 Nsp2-ELISA、Nsp7-ELISA阴阳临界值的确定 | 第42-44页 |
| 4.1.5 Nsp2-ELISA、Nsp7-ELISA、N-ELISA三种检测PRRSV抗体的ELISA方法的比较 | 第44-45页 |
| 4.1.6 Yhbw以及Nsp7-Yhbw基因原核表达质粒的构建 | 第45-47页 |
| 4.1.7 Yhbw以及Nsp7-Yhbw的原核表达 | 第47-49页 |
| 4.1.8 Yhbw-ELISA、Nsp7-Yhbw-ELISA最佳抗原包被浓度与血清稀释度的确定 | 第49-50页 |
| 4.1.9 Yhbw-ELISA、Nsp7-Yhbw-ELISA阴阳临界值的确定 | 第50-52页 |
| 4.1.10 Yhbw-ELISA、Nsp7-Yhbw-ELISA、Nsp7-ELISA三种检测PRRSV抗体的ELISA方法的比较 | 第52-53页 |
| 4.1.11 PRRSV ELISA方法的建立及应用 | 第53-60页 |
| 4.2 猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白NsP2单克隆抗体的制备 | 第60-63页 |
| 4.2.1 间接ELISA方法的建立 | 第60页 |
| 4.2.2 杂交瘤细胞株的建立 | 第60-61页 |
| 4.2.3 单抗的特异性鉴定 | 第61-63页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第63-69页 |
| 5.1 讨论 | 第63-68页 |
| 5.1.1 截去跨膜区序列的Nsp2基因原核表达质粒的构建以及在大肠杆菌中的表达 | 第63-64页 |
| 5.1.2 pET-28a(+)-Nsp2融合蛋白的纯化 | 第64页 |
| 5.1.3 Yhbw以及Nsp7-Yhbw基因原核表达质粒的构建以及在大肠杆菌中的表达 | 第64-65页 |
| 5.1.4 pET-28b(+)-Yhbw以及pET-28a(+)-Nsp7-Yhbw融合蛋白的纯化 | 第65页 |
| 5.1.5 猪繁殖与呼吸综合征病毒间接ELLSA抗体检测方法的建立 | 第65-66页 |
| 5.1.6 猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白Nsp2单克隆抗体的制备 | 第66-68页 |
| 5.2 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 附录 | 第76页 |
