| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 本文缩写符号 | 第10-14页 |
| 一、引言 | 第14-24页 |
| 1.1 植物细胞壁 | 第15-17页 |
| 1.1.1 初生细胞壁 | 第15-16页 |
| 1.1.2 次生细胞壁 | 第16-17页 |
| 1.2 植物次生壁转录调控研究进展 | 第17-19页 |
| 1.3 植物MYB类转录因子 | 第19-22页 |
| 1.4 立题依据及本文研究意义 | 第22-24页 |
| 二、材料与方法 | 第24-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-27页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第24页 |
| 2.1.2 载体和菌种 | 第24页 |
| 2.1.3 化学试剂 | 第24页 |
| 2.1.4 工具酶 | 第24页 |
| 2.1.5 常用储液 | 第24-25页 |
| 2.1.6 常用缓冲液及提取buffer | 第25-26页 |
| 2.1.7 培养基 | 第26页 |
| 2.1.8 PCR反应试剂及DNA合成、测序 | 第26-27页 |
| 2.1.9 仪器设备 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-46页 |
| 2.2.1 棉花GhMYB103蛋白序列和进化同源性分析 | 第27页 |
| 2.2.2 棉花GhMYB103基因组织表达分析 | 第27-31页 |
| 2.2.3 GhMYB103蛋白转录自激活分析及相互作用分析 | 第31-33页 |
| 2.2.4 GhMYB103::eGFP融合表达载体的构建及蛋白亚细胞定位的观察 | 第33-34页 |
| 2.2.5 拟南芥的遗传转化 | 第34-35页 |
| 2.2.6 拟南芥gDNA提取 | 第35页 |
| 2.2.7 拟南芥RNA提取 | 第35-36页 |
| 2.2.8 棉花gDNA的提取 | 第36-37页 |
| 2.2.9 琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的回收 | 第37页 |
| 2.2.10 大肠杆菌DH5α感受态的制备和转化 | 第37-38页 |
| 2.2.11 碱裂解法提取质粒 | 第38页 |
| 2.2.12 At4CL1pro::GhMYB103过量表达载体的构建 | 第38-40页 |
| 2.2.13 GhRDL1pro::GhMYB103表皮毛特异性表达载体的构建 | 第40页 |
| 2.2.14 GhMYB103显性抑制载体的构建 | 第40-42页 |
| 2.2.15 徒手切片间苯三酚染色法 | 第42页 |
| 2.2.16 半薄树脂切片 | 第42-43页 |
| 2.2.17 次生壁发育相关Marker基因的RT-PCR分析 | 第43页 |
| 2.2.18 细胞壁AIR组分的提取及多糖的衍生化 | 第43-44页 |
| 2.2.19 纤维素含量的测定 | 第44-46页 |
| 三、实验结果 | 第46-79页 |
| 3.1 棉花GhMYB103蛋白的结构与进化分析 | 第46-50页 |
| 3.1.1 棉花GhMYB103蛋白的系统进化分析 | 第46-48页 |
| 3.1.2 棉花GhMYB103蛋白同源性分析 | 第48-50页 |
| 3.1.3 棉花GhMYB103基因结构分析 | 第50页 |
| 3.2 棉花GhMYB103基因组织表达分析 | 第50-51页 |
| 3.3 GhMYB103基因启动子的分离和序列分析 | 第51-54页 |
| 3.4 GhMYB103蛋白亚细胞定位分析 | 第54-55页 |
| 3.5 棉花GhMYB103转录自激活分析 | 第55-57页 |
| 3.5.1 pGBKT7-GhMYB103载体的构建 | 第55页 |
| 3.5.2 酵母阳性克隆的鉴定 | 第55-56页 |
| 3.5.3 GhMYB103自激活检测 | 第56-57页 |
| 3.6 GhMYB103形成同源二聚体 | 第57-59页 |
| 3.7 GhMYB103过量表达转基因拟南芥的表型分析 | 第59-64页 |
| 3.7.1 GhMYB103过量表达载体的构建 | 第59页 |
| 3.7.2 GhMYB103::eGFP过量表达转基因拟南芥筛选与鉴定 | 第59-60页 |
| 3.7.3 GhMYB103过量表达拟南芥花序茎中出现次生壁增厚 | 第60-62页 |
| 3.7.4 次生壁发育相关的标记基因在转基因拟南芥中的表达分析 | 第62-63页 |
| 3.7.5 细胞壁纤维素组分分析 | 第63-64页 |
| 3.8 4CL1pro::GhMYB103转基因拟南芥的表型分析 | 第64-70页 |
| 3.8.1 4CL1pro::GhMYB103载体的构建及拟南芥的遗传转化 | 第64-65页 |
| 3.8.2 4CL1pro::GhMYB103转基因拟南芥的筛选、鉴定与表达分析 | 第65-66页 |
| 3.8.3 4CL1pro::GhMYB103转基因拟南芥中次生壁沉积增多 | 第66-69页 |
| 3.8.4 次生壁发育相关的标记基因在转基因拟南芥中的表达分析 | 第69-70页 |
| 3.9 GhMYB103-AtDR显性抑制拟南芥的表型分析 | 第70-75页 |
| 3.9.1 GhMYB103-AtDR载体的构建及拟南芥的遗传转化 | 第70-71页 |
| 3.9.2 GhMYB103-AtDR转基因拟南芥的筛选、鉴定与表达分析 | 第71-72页 |
| 3.9.3 GhMYB103-AtDR转基因拟南芥中次生壁沉积减少 | 第72-75页 |
| 3.10 GhMYB103-GhDR显性抑制转基因棉花初步分析 | 第75-77页 |
| 3.10.1 GhMYB103-GhDR显性抑制转基因棉花遗传转化 | 第75-76页 |
| 3.10.2 GhMYB103-GhDR显性抑制转基因棉花纤维半薄切片分析 | 第76-77页 |
| 3.11 拟南芥表皮毛特异启动子RDL1pro::GhMYB103拟南芥分析 | 第77-79页 |
| 四、讨论 | 第79-84页 |
| 4.1 GhMYB103属于植物R2R3-MYB转录因子家族 | 第79-80页 |
| 4.2 GhMYB103可能参与棉花纤维次生壁的沉积 | 第80-81页 |
| 4.3 GhMYB103可能参与次生细胞壁中纤维素组分的合成 | 第81-82页 |
| 4.4 GhMYB103的显性抑制使次生壁合成减少 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-90页 |
| 在校期间发表的论文及参加的学术会议 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
