| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 前言 | 第14-15页 |
| 文献综述 | 第15-23页 |
| 第一章 microRNA在病毒感染细胞过程中作用与机制研究进展 | 第15-23页 |
| 1.1 microRNA在细胞内的生物合成及作用机制 | 第15-16页 |
| 1.2 病毒感染对microRNA表达谱的影响 | 第16-17页 |
| 1.3 microRNA对病毒复制、病毒诱导的线粒体损伤和凋亡的调控作用 | 第17-22页 |
| 1.3.1 microRNA对病毒复制的调控 | 第17-19页 |
| 1.3.2 microRNA对病毒诱导细胞凋亡调控 | 第19-20页 |
| 1.3.3 microRNA对线粒体损伤的调控 | 第20-22页 |
| 1.4 本研究的目的意义 | 第22-23页 |
| 试验研究 | 第23-91页 |
| 第二章 TGEV感染诱导PK-15细胞microRNA表达谱变化 | 第23-33页 |
| 2.1 材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 毒种和细胞株 | 第23页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第23-24页 |
| 2.2 方法 | 第24-28页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第24页 |
| 2.2.2 TGEV增殖 | 第24页 |
| 2.2.3 microRNA芯片检测样品制备 | 第24页 |
| 2.2.4 总RNA提取 | 第24页 |
| 2.2.5 microRNA芯片检测 | 第24-26页 |
| 2.2.6 芯片检测结果验证 | 第26-28页 |
| 2.2.7 靶基因预测 | 第28页 |
| 2.2.8 靶基因的GO和KEGG分析 | 第28页 |
| 2.2.9 统计学分析 | 第28页 |
| 2.3 结果 | 第28-31页 |
| 2.3.1 TGEV的增殖 | 第28页 |
| 2.3.2 microRNA表达谱变化及结果验证 | 第28-29页 |
| 2.3.3 microRNA芯片检测结果分析 | 第29-31页 |
| 2.4 讨论 | 第31-32页 |
| 2.5 小结 | 第32-33页 |
| 第三章 miR-4331对TGEV gene 7 转录的影响 | 第33-49页 |
| 3.1 材料 | 第33-34页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第33页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第33-34页 |
| 3.2 方法 | 第34-41页 |
| 3.2.1 miR-4331对TGEV转录的影响 | 第34页 |
| 3.2.2 Real-time PCR检测TGEV基因和各个亚基因组的变化 | 第34-35页 |
| 3.2.3 miR-4331靶基因鉴定 | 第35-39页 |
| 3.2.4 Real-time PCR检测CDCA7 mRNA水平变化 | 第39页 |
| 3.2.5 CDCA7 siRNA设计与合成 | 第39-40页 |
| 3.2.6 siRNA的细胞毒性检测 | 第40页 |
| 3.2.7 重组CDCA7真核表达质粒的构建 | 第40页 |
| 3.2.8 western blotting | 第40-41页 |
| 3.2.9 统计学分析 | 第41页 |
| 3.3 结果 | 第41-47页 |
| 3.3.1 miR-4331对TGEV转录的影响 | 第41页 |
| 3.3.2 miR-4331靶基因验证 | 第41-45页 |
| 3.3.3 miR-4331靶基因CDCA7对TGEV gene 7 转录的影响 | 第45-47页 |
| 3.4 讨论 | 第47-48页 |
| 3.5 小结 | 第48-49页 |
| 第四章 miR-27b对TGEV诱导细胞凋亡的调控 | 第49-68页 |
| 4.1 材料 | 第49-50页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第49页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第49-50页 |
| 4.2 方法 | 第50-56页 |
| 4.2.1 miR-27b过表达效果检测 | 第50页 |
| 4.2.2 流式细胞术检测miR-27b对TGEV诱导的细胞凋亡率的影响 | 第50-51页 |
| 4.2.3 Caspase-3 和caspase-9 活性检测 | 第51页 |
| 4.2.4 miR-27b靶基因双荧光素酶质粒构建 | 第51-55页 |
| 4.2.5 western blotting | 第55页 |
| 4.2.6 Real-time PCR检测RUNX1和Bax mRNA水平 | 第55页 |
| 4.2.7 RUNX1 siRNA的设计与合成 | 第55-56页 |
| 4.2.8 siRNA的细胞毒性检测 | 第56页 |
| 4.2.9 重组RUNX1真核表达质粒构建 | 第56页 |
| 4.2.10 统计学分析 | 第56页 |
| 4.3 结果 | 第56-66页 |
| 4.3.1 miR-27b对TGEV诱导PK-15细胞凋亡的影响 | 第56-59页 |
| 4.3.2 miR-27b凋亡相关靶基因的验证 | 第59-62页 |
| 4.3.3 miR-27b靶基因RUNX1对TGEV诱导的细胞凋亡的作用 | 第62-66页 |
| 4.4 讨论 | 第66-67页 |
| 4.5 小结 | 第67-68页 |
| 第五章 miR-222对TGEV诱导PK-15细胞线粒体损伤的调控 | 第68-91页 |
| 5.1 材料 | 第68-69页 |
| 5.1.1 主要试剂 | 第68页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第68-69页 |
| 5.2 方法 | 第69-75页 |
| 5.2.1 miR-222过表达效果检测 | 第69-70页 |
| 5.2.2 iTRAQ检测蛋白质表达谱的变化 | 第70页 |
| 5.2.3 iTRAQ数据分析 | 第70-71页 |
| 5.2.4 差异表达蛋白的验证 | 第71页 |
| 5.2.5 线粒体膜电位检测 | 第71页 |
| 5.2.6 线粒体钙离子浓度检测 | 第71-72页 |
| 5.2.7 miR-222靶基因验证 | 第72-75页 |
| 5.2.8 THBS1 siRNA设计与合成 | 第75页 |
| 5.2.8 siRNA细胞毒性检测 | 第75页 |
| 5.2.9 统计学分析 | 第75页 |
| 5.3 结果 | 第75-89页 |
| 5.3.1 miR-222对TGEV诱导的线粒体损伤的作用 | 第75-76页 |
| 5.3.2 miR-222过表达后蛋白质组学分析 | 第76-83页 |
| 5.3.4 iTRAQ结果验证 | 第83-84页 |
| 5.3.5 miR-222靶基因鉴定 | 第84-87页 |
| 5.3.6 miR-222靶基因THBS1对线粒体膜电位和钙离子浓度的作用 | 第87-89页 |
| 5.4 讨论 | 第89-90页 |
| 5.5 小结 | 第90-91页 |
| 结论与创新点 | 第91-93页 |
| 结论 | 第91-92页 |
| 创新点 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-101页 |
| 主要缩略词和中英文对照表（abbreviation index） | 第101-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 作者简介 | 第104-105页 |
