| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 文献概述 | 第14-29页 |
| 1.1 研究进展 | 第14-26页 |
| 1.1.1 布病疫情动态 | 第14-17页 |
| 1.1.2 防制与诊断技术进展 | 第17-19页 |
| 1.1.3 世界布鲁氏菌疫苗概况 | 第19-20页 |
| 1.1.4 蛋白组学及其研究技术 | 第20-23页 |
| 1.1.5 免疫蛋白组学及其在布鲁氏菌研究中的应用 | 第23-25页 |
| 1.1.6 布鲁氏菌外膜相关蛋白诊断抗原研究进展 | 第25-26页 |
| 1.2 研究内容及意义 | 第26-28页 |
| 1.3 研究技术路线 | 第28-29页 |
| 第二章 中国猪种布鲁氏菌病活疫苗(S2株)在BALB/c小鼠中的评价 | 第29-44页 |
| 2.1 前言 | 第29页 |
| 2.2 材料 | 第29-30页 |
| 2.2.1 实验动物 | 第29-30页 |
| 2.2.2 实验所需的菌株、培养基与试剂 | 第30页 |
| 2.2.3 主要仪器与设备 | 第30页 |
| 2.3 方法 | 第30-34页 |
| 2.3.1 试验分组 | 第30-31页 |
| 2.3.2 S2株在小鼠脾脏定殖试验 | 第31页 |
| 2.3.3 免疫后脾细胞细胞免疫应答水平 | 第31-33页 |
| 2.3.4 免疫后外周血抗体消涨规律检测 | 第33页 |
| 2.3.5 小鼠免疫攻毒试验 | 第33-34页 |
| 2.4 结果 | 第34-43页 |
| 2.4.1 S2株在小鼠脾脏定殖情况 | 第34-36页 |
| 2.4.2 S2免疫后细胞免疫应答指标监测 | 第36-37页 |
| 2.4.3 S2免疫后抗体消涨规律变化 | 第37-38页 |
| 2.4.4 免疫攻毒试验 | 第38-40页 |
| 2.4.5 组织病理学结果 | 第40-43页 |
| 2.5 讨论 | 第43-44页 |
| 第三章 基于凝胶电泳的免疫蛋白质组学技术筛选S2鉴别诊断候选抗原蛋白靶点 | 第44-63页 |
| 3.1 前言 | 第44页 |
| 3.2 材料 | 第44-46页 |
| 3.2.1 实验动物 | 第44页 |
| 3.2.2 菌株及来源 | 第44页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第44-45页 |
| 3.2.4 主要试剂及耗材 | 第45页 |
| 3.2.5 常用布鲁氏菌培养基及稀释溶液 | 第45页 |
| 3.2.6 2DE、western-blot及MALDI-TOF质谱试验用溶液 | 第45-46页 |
| 3.3 方法 | 第46-49页 |
| 3.3.1 布鲁氏菌膜蛋白提取 | 第46页 |
| 3.3.2 膜蛋白浓度定量及电泳 | 第46-47页 |
| 3.3.3 双向电泳 | 第47-48页 |
| 3.3.4 湿转印 | 第48页 |
| 3.3.5 染色 | 第48页 |
| 3.3.6 图像扫描与分析 | 第48页 |
| 3.3.7 切胶、脱色、酶解消化、质谱 | 第48-49页 |
| 3.3.8 蛋白鉴定和分析 | 第49页 |
| 3.4 结果 | 第49-61页 |
| 3.4.1 布鲁氏菌灭活结果 | 第49-50页 |
| 3.4.2 S2膜蛋白SDS-PAGE及浓度测定结果 | 第50-51页 |
| 3.4.3 布鲁氏菌S2株膜蛋白双相电泳和Western-blot结果 | 第51-53页 |
| 3.4.4 分析鉴定及功能分析 | 第53-60页 |
| 3.4.5 可能诊断靶点信息列表 | 第60-61页 |
| 3.5 讨论 | 第61-63页 |
| 第四章 基于免疫共沉淀的蛋白质组学技术筛选S2鉴别诊断抗原蛋白靶点 | 第63-75页 |
| 4.1 前言 | 第63页 |
| 4.2 材料 | 第63-64页 |
| 4.2.1 实验动物 | 第63页 |
| 4.2.2 菌株及来源 | 第63页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第63页 |
| 4.2.4 IP试验用溶液 | 第63-64页 |
| 4.3 方法 | 第64-65页 |
| 4.3.1 布鲁氏菌膜蛋白提取及定量 | 第64页 |
| 4.3.2 免疫共沉淀 | 第64页 |
| 4.3.3 切胶、脱色、酶解消化、质谱和蛋白鉴定 | 第64-65页 |
| 4.3.4 蛋白鉴定和分析 | 第65页 |
| 4.4 结果 | 第65-73页 |
| 4.4.1 S2膜蛋白提取SDS-PAGE及浓度测定结果 | 第65页 |
| 4.4.2 不同血清与S2膜蛋白免疫共沉淀结果 | 第65-66页 |
| 4.4.3 免疫共沉淀获得质谱点信息列表 | 第66-69页 |
| 4.4.4 所鉴定的鉴别诊断抗原的功能分析 | 第69-71页 |
| 4.4.5 可能的鉴别诊断抗原蛋白 | 第71-73页 |
| 4.5 讨论 | 第73-75页 |
| 第五章 候选鉴别诊断抗原蛋白的体外表达及间接ELISA方法的初步建立 | 第75-96页 |
| 5.1 前言 | 第75页 |
| 5.2 材料 | 第75-76页 |
| 5.2.1 菌株和载体 | 第75页 |
| 5.2.2 主要试剂耗材 | 第75页 |
| 5.2.3 主要仪器 | 第75-76页 |
| 5.3 方法 | 第76-81页 |
| 5.3.1 种子及细菌悬液的制备 | 第76页 |
| 5.3.2 细菌基因组DNA的提取 | 第76页 |
| 5.3.3 引物设计与合成 | 第76页 |
| 5.3.4 10种基因的PCR扩增 | 第76页 |
| 5.3.5 目的基因的回收 | 第76-77页 |
| 5.3.6 重组表达质粒的构建 | 第77-78页 |
| 5.3.7 重组质粒转化 | 第78页 |
| 5.3.8 诱导、表达及验证 | 第78页 |
| 5.3.9 具有鉴别诊断价值的表达蛋白筛选 | 第78-79页 |
| 5.3.10 重组蛋白的纯化 | 第79-80页 |
| 5.3.11 ELISA方法验证及条件优化 | 第80页 |
| 5.3.12 鉴别诊断抗原ELISA检测方法cut-off值的确立 | 第80-81页 |
| 5.3.13 ELISA对临床样本的检测 | 第81页 |
| 5.4 结果 | 第81-90页 |
| 5.4.1 2DE&Western-blot&MALDI-TOF与IP&QE共同鉴定的蛋白点 | 第81页 |
| 5.4.2 猪布鲁氏菌S2株抗原的克隆 | 第81-83页 |
| 5.4.3 重组蛋白的表达 | 第83-84页 |
| 5.4.4 重组蛋白与三种血清的Western-blot | 第84-85页 |
| 5.4.5 重组蛋白与三种血清的ELISA反应 | 第85-86页 |
| 5.4.6 重组蛋白的纯化 | 第86页 |
| 5.4.7 重组蛋白ELISA方法的建立 | 第86-89页 |
| 5.4.8 鉴别诊断抗原间接ELISA检测免疫血清的临界值(Cut-off) | 第89-90页 |
| 5.4.9 运用建立的间接ELISA方法对临床样本检测 | 第90页 |
| 5.5 讨论 | 第90-96页 |
| 第六章 结论与创新点 | 第96-98页 |
| 6.1 结论 | 第96页 |
| 6.2 创新点 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-108页 |
| 致谢 | 第108-110页 |
| 作者简历 | 第110页 |
