| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-22页 |
| 1.1 引言 | 第9-10页 |
| 1.2 生物法生产丁醇 | 第10-11页 |
| 1.3 大肠杆菌作为细胞工厂生产平台化合物 | 第11页 |
| 1.4 大肠杆菌丁醇耐受性的研究 | 第11-15页 |
| 1.4.1 丁醇对菌体的毒害作用机制 | 第11-12页 |
| 1.4.2 大肠杆菌丁醇耐受性机制的研究 | 第12页 |
| 1.4.3 耐丁醇大肠杆菌的研究 | 第12-15页 |
| 1.5 基因组改组技术及易错PCR | 第15-17页 |
| 1.5.1 基因组改组技术 | 第15-16页 |
| 1.5.2 易错PCR及ePCR的全基因组改组 | 第16-17页 |
| 1.6 基因功能研究 | 第17-20页 |
| 1.6.1 功能基因的生物信息学预测 | 第18页 |
| 1.6.2 蛋白水平的表达谱分析 | 第18页 |
| 1.6.3 基因功能的研究方法 | 第18-20页 |
| 1.7 本课题的提出及意义 | 第20-22页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第22-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-28页 |
| 2.1.1 菌株、质粒及引物 | 第22-26页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第26-27页 |
| 2.1.3 试剂 | 第27页 |
| 2.1.4 培养基 | 第27页 |
| 2.1.5 主要试剂 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-34页 |
| 2.2.1 大肠杆菌BW25113基因组的提取 | 第28-29页 |
| 2.2.2 ePCR扩增 | 第29页 |
| 2.2.3 感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| 2.2.4 电转化及抗性转化子的筛选 | 第30页 |
| 2.2.5 转化子丁醇耐受性评价 | 第30-31页 |
| 2.2.6 中间培养及耐受性评价 | 第31页 |
| 2.2.7 菌株稳定性评价 | 第31-32页 |
| 2.2.8 菌株BW1847A2和BW1857A2短链醇的耐受性评价实验 | 第32页 |
| 2.2.9 菌种鉴定 | 第32页 |
| 2.2.10 全基因组重测序 | 第32页 |
| 2.2.11 BW847A2和BW1857A2菌株的突变基因功能研究 | 第32-34页 |
| 第三章 结果与分析 | 第34-63页 |
| 3.1 运用ePCR全基因组改组技术提高大肠杆菌的丁醇耐受性 | 第34-42页 |
| 3.1.1 以BW25113（pKD46）为出发菌株进行第一轮改组 | 第35-37页 |
| 3.1.2 菌株BW134的第二轮改组 | 第37-40页 |
| 3.1.3 以BW184为出发菌株进行第三轮改组 | 第40-41页 |
| 3.1.4 中间培养 | 第41-42页 |
| 3.2 菌株稳定性评价 | 第42-44页 |
| 3.3 转化子BW1847A2和BW1857A2耐受短链醇的评价实验 | 第44-47页 |
| 3.4 基因组重测序 | 第47-49页 |
| 3.5 基因敲除 | 第49-56页 |
| 3.5.1 基因缺失突变体的构建及鉴定 | 第51-54页 |
| 3.5.2 基因缺失突变体丁醇耐受性评价 | 第54-56页 |
| 3.6 耐丁醇葡萄球菌的筛选 | 第56-63页 |
| 3.6.1 丁醇耐受菌的获得 | 第56-57页 |
| 3.6.2 丁醇胁迫下K12和KP1-2 的生长评价 | 第57-58页 |
| 3.6.3 KP1-2 的菌种鉴定及进化分析 | 第58-59页 |
| 3.6.4 葡萄糖的添加对S.aureus KP1-2 丁醇耐受性的影响 | 第59-60页 |
| 3.6.5 乙醇耐受性评价 | 第60-63页 |
| 第四章 结论与展望 | 第63-65页 |
| 4.1 结论 | 第63页 |
| 4.2 展望 | 第63-64页 |
| 4.3 创新点 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-72页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
