| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩略词表 | 第7-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-24页 |
| 1.1 Rb的概述 | 第12-13页 |
| 1.1.1 Rb的结构与功能 | 第12页 |
| 1.1.2 Rb与肿瘤的关系 | 第12-13页 |
| 1.2 CD44的概述 | 第13-15页 |
| 1.2.1 CD44的结构与功能 | 第13-14页 |
| 1.2.2 CD44在肿瘤中的作用 | 第14-15页 |
| 1.3 Smad蛋白的概述 | 第15-16页 |
| 1.4 BMPs的研究进展 | 第16-19页 |
| 1.4.1 TGF-β | 第16页 |
| 1.4.2 BMP信号通路概述 | 第16-18页 |
| 1.4.3 BMP与肿瘤的关系 | 第18-19页 |
| 1.5 乳腺癌及其体内转移过程 | 第19-21页 |
| 1.6 肿瘤干细胞的概述 | 第21-22页 |
| 1.6.1 肿瘤干细胞的特征 | 第21页 |
| 1.6.2 乳腺癌肿瘤干细胞的表面标志物 | 第21-22页 |
| 1.7 研究目的及意义 | 第22-23页 |
| 1.7.1 研究目的 | 第22页 |
| 1.7.2 研究意义 | 第22-23页 |
| 1.8 技术路线 | 第23-24页 |
| 第二章 实验材料和仪器 | 第24-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 细胞株与蛋白 | 第24页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第24-26页 |
| 2.2 常用溶液及配方 | 第26-29页 |
| 2.3 仪器与设备 | 第29-31页 |
| 第三章 实验方法 | 第31-43页 |
| 3.1 细胞培养 | 第31-32页 |
| 3.1.1 细胞复苏 | 第31页 |
| 3.1.2 细胞传代 | 第31页 |
| 3.1.3 细胞冻存 | 第31-32页 |
| 3.2 ELISA法检测MCF-7 细胞内源BMP-2 表达 | 第32页 |
| 3.3 rh BMP-2 诱导 MCF-7 细胞 | 第32-33页 |
| 3.4 Western Blot检测相关蛋白的表达 | 第33-35页 |
| 3.4.1 MCF-7 细胞总蛋白的抽提（核蛋白Rb） | 第33页 |
| 3.4.2 MCF-7 细胞总蛋白的抽提 | 第33页 |
| 3.4.3 BCA法测定总蛋白含量 | 第33-34页 |
| 3.4.4 SDS-PAGE分离蛋白 | 第34页 |
| 3.4.5 转膜 | 第34-35页 |
| 3.4.6 封闭 | 第35页 |
| 3.4.7 孵育一抗 | 第35页 |
| 3.4.8 孵育二抗 | 第35页 |
| 3.4.9 显影及曝光 | 第35页 |
| 3.5 LY294002抑制剂或MK-2206 抑制剂处理MCF-7 细胞 | 第35页 |
| 3.6 瞬时转染si RNA沉默相关基因的表达 | 第35-36页 |
| 3.7 实时定量PCR检测Rb及CD44 si RNA的干扰效率 | 第36-40页 |
| 3.7.1 Trizol法提取细胞RNA | 第37页 |
| 3.7.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第37-38页 |
| 3.7.3 逆转录合成cDNA | 第38页 |
| 3.7.4 实时定量PCR | 第38-39页 |
| 3.7.5 数据分析方法 | 第39-40页 |
| 3.8 流式细胞仪分析CD44+/CD24- 群细胞比例 | 第40页 |
| 3.9 三维细胞培养（胶上培养）观察肿瘤干细胞球体形成 | 第40页 |
| 3.10 CCK-8 法检测三维细胞培养MCF-7 细胞的增殖率 | 第40-41页 |
| 3.11 免疫组化检测乳腺癌肿瘤标本中相关基因（BMP-2，Rb，CD44）的表达相关性 | 第41-42页 |
| 3.11.1 肿瘤标本的固定、切片及染色 | 第41页 |
| 3.11.2 免疫组化染色评判标准 | 第41-42页 |
| 3.12 统计学方法 | 第42-43页 |
| 第四章 实验结果 | 第43-62页 |
| 4.1 MCF-7 细胞中BMP-2 的内源表达及rhBMP-2 诱导后激活BMP信号 | 第43-44页 |
| 4.1.1 MCF-7 细胞中BMP-2 的内源表达 | 第43-44页 |
| 4.1.2 rhBMP-2 诱导后激活MCF-7 细胞的BMP信号通路 | 第44页 |
| 4.2 细胞水平研究rhBMP-2 促MCF-7 细胞迁移中上调CD44、下调Rb的表达 | 第44-45页 |
| 4.3 细胞水平研究rhBMP-2 上调CD44表达的信号通路 | 第45-47页 |
| 4.3.1 Smad4 si RNA最佳干扰条件的确定 | 第45-46页 |
| 4.3.2 Smad4在rhBMP-2 上调CD44表达中的作用 | 第46-47页 |
| 4.4 细胞水平研究rhBMP-2 下调Rb表达的信号通路 | 第47-51页 |
| 4.4.1 Smad4在rhBMP-2 下调Rb表达中的作用 | 第48页 |
| 4.4.2 PI3K-AKT信号通路在rhBMP-2 下调Rb表达中的作用 | 第48-51页 |
| 4.5 细胞水平研究rhBMP-2 上调CD44表达、下调Rb表达的交叉信号 | 第51-53页 |
| 4.5.1 rhBMP-2 上调CD44表达、下调Rb表达过程中存在交叉信号 | 第51-52页 |
| 4.5.2 Rb与CD44的上下游关系 | 第52-53页 |
| 4.6 rhBMP-2 增加乳腺癌干细胞特性 | 第53-57页 |
| 4.6.1 rhBMP-2 诱导肿瘤干细胞的表达 | 第53-55页 |
| 4.6.2 rhBMP-2 诱导肿瘤干细胞球体形成 | 第55-56页 |
| 4.6.3 CCK-8 法检测三维细胞培养后细胞的增殖率 | 第56-57页 |
| 4.7 体内水平研究BMP-2 与CD44、Rb的表达相关性 | 第57-61页 |
| 4.7.1 免疫组化检测乳腺癌肿瘤标本中CD44与BMP-2 的表达相关性 | 第57-59页 |
| 4.7.2 免疫组化检测乳腺癌肿瘤标本中Rb与BMP-2 的表达相关性 | 第59-61页 |
| 小结 | 第61-62页 |
| 第五章 讨论、总结与展望 | 第62-65页 |
| 5.1 讨论与总结 | 第62-64页 |
| 5.2 展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-74页 |
| 附录 | 第74-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
