| 缩略词表 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-19页 |
| 1.1 前言 | 第10页 |
| 1.2 超氧化物歧化酶 | 第10-11页 |
| 1.3 铜锌超氧化物歧化酶(SOD1)的结构和性质 | 第11页 |
| 1.4 超氧化物歧化酶的种类和分布 | 第11-12页 |
| 1.5 超氧化物歧化酶(SOD)的应用 | 第12-14页 |
| 1.5.1 SOD在抗衰老中的应用 | 第12-13页 |
| 1.5.2 SOD在医疗临床中应用 | 第13页 |
| 1.5.3 SOD在保健品和食品中的应用 | 第13页 |
| 1.5.4 SOD在化妆品中的应用 | 第13-14页 |
| 1.6 SOD的国内外研究现状及前景 | 第14页 |
| 1.7 研究目的和意义、内容和技术路线 | 第14-19页 |
| 1.7.1 研究目的和意义 | 第14页 |
| 1.7.2 研究内容 | 第14-16页 |
| 1.7.3 技术路线 | 第16-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-41页 |
| 2.1 材料和仪器 | 第19-21页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第19页 |
| 2.1.2 主要试剂和酶 | 第19页 |
| 2.1.3 培养基 | 第19页 |
| 2.1.4 常用溶液及缓冲液 | 第19-21页 |
| 2.1.5 主要仪器和设备 | 第21页 |
| 2.2 方法与步骤 | 第21-41页 |
| 2.2.1 Aj-SOD1的生物信息学分析 | 第21-22页 |
| 2.2.2 Aj-SOD1在各组织中表达 | 第22-23页 |
| 2.2.3 仿刺参体腔细胞的原代培养 | 第23-25页 |
| 2.2.4 Western blot检测细胞中蛋白的表达 | 第25-28页 |
| 2.2.5 重组克隆载体pMD18-SOD1/DH5α的构建 | 第28-33页 |
| 2.2.6 Aj-SOD1重组表达质粒的构建 | 第33-35页 |
| 2.2.7 Aj-SOD1基因工程菌的可溶性表达 | 第35-36页 |
| 2.2.8 Aj-SOD1表达条件的优化 | 第36页 |
| 2.2.9 Aj-SOD1的分离纯化及活性分析 | 第36-41页 |
| 第三章 Aj-SOD1的组织分布及其抗氧化作用 | 第41-48页 |
| 3.1 Aj-SOD1基因的生物信息学分析结果 | 第41-43页 |
| 3.1.1 Aj-SOD1序列同源性分析及蛋白质三级结构预测 | 第41-42页 |
| 3.1.2 Aj-SOD1系统发育树的构建 | 第42-43页 |
| 3.2 Aj-SOD1基因在组织中分布 | 第43页 |
| 3.3 H_2O_2对细胞凋亡的影响及Aj-SOD1的抗氧化作用 | 第43-44页 |
| 3.4 H_2O_2刺激下验证Aj-SOD1对受损细胞修复作用的影响 | 第44-45页 |
| 3.5 LPS对细胞凋亡的影响及Aj-SOD1蛋白修复作用 | 第45-46页 |
| 3.6 Western blot检测细胞中蛋白的表达 | 第46-47页 |
| 3.7 结果与分析 | 第47-48页 |
| 第四章 Aj-SOD1表达载体的构建、表达及纯化 | 第48-62页 |
| 4.1 重组Aj-SOD1克隆质粒的构建 | 第48-50页 |
| 4.1.1 Aj-SOD1克隆质粒构建流程图、肠总RNA的提取、反转录验证 | 第48-50页 |
| 4.1.2 Aj-SOD1目的基因的克隆结果 | 第50页 |
| 4.2 重组Aj-SOD1表达质粒的构建 | 第50-52页 |
| 4.2.1 Aj-SOD1表达质粒构建流程图及表达质粒构建结果 | 第50-52页 |
| 4.3 基因工程菌Aj-SOD1可溶性表达 | 第52-53页 |
| 4.3.1 Aj-SOD1蛋白外源诱导表达及鉴定 | 第52-53页 |
| 4.4 重组Aj-SOD1蛋白的western blot检测 | 第53-54页 |
| 4.5 Aj-SOD1基因工程菌对H_2O_2的抗氧化能力分析 | 第54-55页 |
| 4.6 基因工程菌表达Aj-SOD1蛋白的条件优化 | 第55-58页 |
| 4.6.1 发酵温度对Aj-SOD1蛋白表达量的影响 | 第55-56页 |
| 4.6.2 诱导时间对Aj-SOD1产量的影响 | 第56页 |
| 4.6.3 转速对Aj-SOD1蛋白表达量的影响 | 第56-57页 |
| 4.6.4 诱导剂IPTG浓度对Aj-SOD1蛋白表达量的影响 | 第57-58页 |
| 4.6.5 Cu~(2+)、Zn~(2+)浓度对Aj-SOD1蛋白表达量的影响 | 第58页 |
| 4.7 Aj-SOD1的分离纯化 | 第58-59页 |
| 4.8 邻苯三酚法检测Aj-SOD1抗氧化活性分析 | 第59-60页 |
| 4.9 结果与分析 | 第60-62页 |
| 第五章 结论与展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 附录一 | 第68-69页 |
| 附录二 | 第69页 |
