| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第12-34页 |
| 1.1 手性化合物 | 第12-16页 |
| 1.1.1 手性药物及手性中间体的合成 | 第13-15页 |
| 1.1.1.1 化学拆分法 | 第13页 |
| 1.1.1.2 不对称合成 | 第13-14页 |
| 1.1.1.3 微生物或酶催化拆分 | 第14-15页 |
| 1.1.2 微生物转化反应的特点 | 第15-16页 |
| 1.2 (-)2-氮杂双环-[2.2.1]-庚烷-5-烯-3-酮(简称γ-内酰胺)及其应用 | 第16-18页 |
| 1.3 (+/-))γ-内酰胺的拆分研究进展 | 第18-19页 |
| 1.3.1 色谱分离法 | 第18页 |
| 1.3.2 微生物酶法 | 第18-19页 |
| 1.4 诱变育种 | 第19-23页 |
| 1.4.1 诱变机理 | 第20-21页 |
| 1.4.2 诱变剂的选择 | 第21-22页 |
| 1.4.3 诱变育种的应用及研究进展 | 第22-23页 |
| 1.5 产γ-内酰胺酶高产菌株发酵条件的优化 | 第23页 |
| 1.5.1 培养基的组成 | 第23页 |
| 1.5.2 培养条件 | 第23页 |
| 1.6 细胞固定化 | 第23-32页 |
| 1.6.1 细胞固定化材料 | 第24-26页 |
| 1.6.1.1 天然高分子凝胶载体 | 第24-25页 |
| 1.6.1.2 合成有机高分子凝胶载体 | 第25-26页 |
| 1.6.1.3 无机载体 | 第26页 |
| 1.6.1.4 复合载体 | 第26页 |
| 1.6.2 细胞固定化材料的选择依据 | 第26-27页 |
| 1.6.3 细胞固定化方法 | 第27-28页 |
| 1.6.3.1 包埋法 | 第27页 |
| 1.6.3.2 吸附法 | 第27-28页 |
| 1.6.3.3 共价结合法 | 第28页 |
| 1.6.3.4 交联法 | 第28页 |
| 1.6.3.5 絮凝法 | 第28页 |
| 1.6.4 细胞固定化方法的选择 | 第28-29页 |
| 1.6.5 细胞固定化研究进展 | 第29-31页 |
| 1.6.6 细胞固定化的应用 | 第31-32页 |
| 1.6.6.1 废水处理中的应用 | 第31页 |
| 1.6.6.2 酿酒工业中的应用 | 第31页 |
| 1.6.6.3 生物传感器 | 第31-32页 |
| 1.6.6.4 其它领域 | 第32页 |
| 1.7 课题研究的意义及内容 | 第32-34页 |
| 第二章 γ-内酰胺水解酶高产菌株的选育 | 第34-52页 |
| 2.1 引言 | 第34页 |
| 2.2 材料与方法 | 第34-40页 |
| 2.2.1 主要试剂、药品 | 第34-35页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第35页 |
| 2.2.3 培养基 | 第35页 |
| 2.2.4 菌种 | 第35-36页 |
| 2.2.5 出发菌株的活化 | 第36页 |
| 2.2.6 培养与转化方法 | 第36-38页 |
| 2.2.6.1 斜面培养方法 | 第36页 |
| 2.2.6.2 种子液培养方法 | 第36页 |
| 2.2.6.3 摇瓶培养方法 | 第36页 |
| 2.2.6.4 生物量的测定 | 第36页 |
| 2.2.6.5 菌株的试管培养及预处理 | 第36-37页 |
| 2.2.6.6 菌株的摇瓶培养及预处理 | 第37页 |
| 2.2.6.7 完整细胞转化γ-内酰胺 | 第37页 |
| 2.2.6.8 转化产物ee值的测定及计算方法 | 第37页 |
| 2.2.6.9 酶活定义及酶活测定方法 | 第37-38页 |
| 2.2.7 稀释度实验以及菌悬液的制备 | 第38页 |
| 2.2.8 紫外线诱变方法 | 第38-39页 |
| 2.2.8.1 紫外线照射剂量的选择 | 第38-39页 |
| 2.2.8.2 紫外线诱变具体方法 | 第39页 |
| 2.2.9 化学诱变方法 | 第39页 |
| 2.2.9.1 硫酸二乙酯(DES)剂量的选择 | 第39页 |
| 2.2.9.2 化学诱变具体方法 | 第39页 |
| 2.2.10 突变株筛选方法 | 第39-40页 |
| 2.2.10.1 初筛方法 | 第40页 |
| 2.2.10.2 复筛方法 | 第40页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第40-51页 |
| 2.3.1 出发菌株酶活及ee值检测结果 | 第40-41页 |
| 2.3.2 生物量测定结果 | 第41-42页 |
| 2.3.3 内标法标准曲线 | 第42-43页 |
| 2.3.4 稀释度试验结果 | 第43页 |
| 2.3.5 紫外线诱变 | 第43-47页 |
| 2.3.5.1 致死率与紫外线照射时间关系 | 第43页 |
| 2.3.5.2 初筛 | 第43-45页 |
| 2.3.5.3 复筛 | 第45-47页 |
| 2.3.6 化学诱变 | 第47-51页 |
| 2.3.6.1 DES剂量的选择 | 第47-48页 |
| 2.3.6.2 致死率与DES处理时间关系 | 第48页 |
| 2.3.6.3 初筛 | 第48-49页 |
| 2.3.6.4 复筛 | 第49-51页 |
| 2.3.6.5 突变菌遗传稳定性考察 | 第51页 |
| 2.4 小结 | 第51-52页 |
| 第三章 高产菌株发酵条件优化及转化条件研究 | 第52-66页 |
| 3.1 引言 | 第52页 |
| 3.2 材料与方法 | 第52-55页 |
| 3.2.1 主要试剂、药品 | 第53-54页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第54页 |
| 3.2.3 菌种和培养基 | 第54-55页 |
| 3.2.3.1 菌种 | 第54页 |
| 3.2.3.2 种子液培养基 | 第54页 |
| 3.2.3.3 摇瓶培养基 | 第54-55页 |
| 3.2.3.4 研究培养条件时的培养基 | 第55页 |
| 3.2.4 实验方法 | 第55页 |
| 3.2.4.1 菌株L29-9-B-4的液体培养及预处理 | 第55页 |
| 3.2.4.2 菌株L29-9-B-4完整细胞转化γ-内酰胺 | 第55页 |
| 3.2.4.3 HPLC确定酶活及ee值 | 第55页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第55-60页 |
| 3.3.1 碳源对酶活的影响 | 第55-56页 |
| 3.3.2 氮源对酶活的影响 | 第56-57页 |
| 3.3.3 可溶性淀粉浓度对酶活和转化产物ee值的影响 | 第57-58页 |
| 3.3.4 牛肉膏浓度对酶活和ee值的影响 | 第58页 |
| 3.3.5 诱导物浓度对酶活和ee值的影响 | 第58-59页 |
| 3.3.6 生长曲 | 第59-60页 |
| 3.3.7 培养时间对转化产物ee值的影响 | 第60页 |
| 3.4 转化过程中参数的影响 | 第60-64页 |
| 3.4.1 底物γ-内酰胺浓度对转化产物ee值及产率的影响 | 第60-61页 |
| 3.4.2 pH值对转化的影响 | 第61-62页 |
| 3.4.3 反应体系中温度对转化的影响 | 第62页 |
| 3.4.4 反应体系中转化时间对转化的影响 | 第62-63页 |
| 3.4.5 反应体系中添加表面活性剂的影响 | 第63-64页 |
| 3.5 小结 | 第64-66页 |
| 第四章 高产菌株的固定化 | 第66-76页 |
| 4.1 引言 | 第66页 |
| 4.2 材料与方法 | 第66-70页 |
| 4.2.1 主要试剂、药品 | 第66-67页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第67页 |
| 4.2.3 菌种和培养基 | 第67-68页 |
| 4.2.3.1 菌种 | 第67页 |
| 4.2.3.2 种子液培养基 | 第67-68页 |
| 4.2.3.3 摇瓶培养基 | 第68页 |
| 4.2.4 菌株L29-9-B-4的液体培养 | 第68页 |
| 4.2.4.1 种子培养 | 第68页 |
| 4.2.4.2 摇瓶培养 | 第68页 |
| 4.2.5 菌悬液的制备 | 第68页 |
| 4.2.6 固定化方法 | 第68-70页 |
| 4.2.6.1 海藻酸钙包埋法 | 第68-69页 |
| 4.2.6.2 聚乙烯醇交联法 | 第69页 |
| 4.2.6.3 聚乙烯醇-海藻酸钙联合包埋法 | 第69页 |
| 4.2.6.4 明胶-戊二醛交联法 | 第69页 |
| 4.2.6.5 海藻酸铝包埋法 | 第69页 |
| 4.2.6.6 海藻酸钙-壳聚糖联合包埋法 | 第69-70页 |
| 4.2.7 固定化细胞ee值的测定 | 第70页 |
| 4.2.8 聚乙烯醇-海藻酸钙凝胶混合固定化条件优化 | 第70页 |
| 4.2.9 菌体加入量对固定化细胞成型效果及产物ee值的影响 | 第70页 |
| 4.2.10 固定化细胞转化批次的研究 | 第70页 |
| 4.2.11 有机溶剂处理对固定化细胞转化的影响 | 第70页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第70-74页 |
| 4.3.1 几种固定化方法的比较 | 第70-71页 |
| 4.3.2 聚乙烯醇-海藻酸钙凝胶混合固定化条件优化 | 第71页 |
| 4.3.3 菌体加入量对固定化细胞成型效果及产物ee值的影响 | 第71-72页 |
| 4.3.4 固定化细胞转化批次 | 第72-73页 |
| 4.3.5 有机溶剂处理对固定化细胞转化的影响 | 第73-74页 |
| 4.4 小结 | 第74-76页 |
| 第五章 结论 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第84-86页 |
| 作者及导师简介 | 第86-87页 |
| 附件 | 第87-88页 |
