副猪嗜血杆菌的分离与单抗制备及其抗原表位鉴定
| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一章 副猪嗜血杆菌的研究进展 | 第13-19页 |
| ·副猪嗜血杆菌研究概况 | 第13-16页 |
| ·病原学 | 第13页 |
| ·诊断和分型 | 第13-14页 |
| ·流行病学 | 第14页 |
| ·毒力相关因子的研究 | 第14-15页 |
| ·关于转铁蛋白的研究 | 第15-16页 |
| ·抗原表位研究 | 第16-17页 |
| ·B 细胞抗原表位的研究技术 | 第16-17页 |
| ·噬菌体展示技术 | 第17-18页 |
| ·噬菌体展示技术的原理 | 第17页 |
| ·噬菌体展示技术在抗原表位研究中的应用 | 第17页 |
| ·噬菌体展示技术的优势 | 第17-18页 |
| ·研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药敏试验 | 第19-25页 |
| ·材料与方法 | 第19-21页 |
| ·病料来源 | 第19页 |
| ·培养基 | 第19页 |
| ·核酸提取 | 第19页 |
| ·PCR 鉴定 | 第19页 |
| ·细菌分离与鉴定 | 第19-20页 |
| ·tbpA 的扩增及产物纯化 | 第20页 |
| ·RFLP 分型 | 第20页 |
| ·生化鉴定 | 第20页 |
| ·药敏试验 | 第20-21页 |
| ·实验结果 | 第21-23页 |
| ·PCR 的鉴定结果 | 第21页 |
| ·tbpA 的PCR 扩增 | 第21-22页 |
| ·RFLP 分型 | 第22页 |
| ·生化鉴定结果 | 第22-23页 |
| ·药敏试验结果 | 第23页 |
| ·讨论 | 第23-25页 |
| 第三章 单克隆抗体制备 | 第25-33页 |
| ·材料 | 第25页 |
| ·菌株与实验动物 | 第25页 |
| ·试剂与药品 | 第25页 |
| ·仪器与设备 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-26页 |
| ·副猪嗜血杆菌培养 | 第25页 |
| ·动物免疫 | 第25-26页 |
| ·外膜蛋白提取 | 第26页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第26-30页 |
| ·饲养层细胞的制备 | 第26页 |
| ·SP2/0 细胞与脾细胞的制备 | 第26-27页 |
| ·细胞融合 | 第27页 |
| ·间接ELISA 法检测系统的建立 | 第27页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第27-28页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的克隆 | 第28页 |
| ·阳性杂交瘤细胞冻存与复苏 | 第28页 |
| ·单克隆抗体腹水的制备及效价的测定 | 第28页 |
| ·腹水中单克隆抗体的纯化 | 第28-29页 |
| ·杂交瘤细胞的鉴定 | 第29页 |
| ·单克隆抗体亚类的鉴定 | 第29页 |
| ·单克隆抗体特异性的鉴定 | 第29-30页 |
| ·结果 | 第30-31页 |
| ·间接ELISA 方法的建立 | 第30页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第30页 |
| ·杂交瘤细胞染色体分析 | 第30页 |
| ·单克隆抗体亚类的鉴定 | 第30-31页 |
| ·单克隆抗体纯化以及浓度测定 | 第31页 |
| ·单克隆抗体鉴定 | 第31页 |
| ·讨论 | 第31-33页 |
| 第四章 细菌体内清除实验 | 第33-38页 |
| ·材料与方法 | 第33页 |
| ·菌株与实验动物 | 第33页 |
| ·主要试剂与药品 | 第33页 |
| ·仪器设备 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-34页 |
| ·副猪嗜血杆菌培养 | 第33页 |
| ·副猪嗜血杆菌生长曲线的测定 | 第33-34页 |
| ·多克隆抗体血清的制备 | 第34页 |
| ·小鼠感染试验 | 第34页 |
| ·单克隆抗体体内细菌清除试验 | 第34页 |
| ·结果 | 第34-36页 |
| ·细菌生长曲线的测定 | 第34-35页 |
| ·动物感染实验 | 第35页 |
| ·体内杀菌试验 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-38页 |
| 第五章 利用噬菌体展示技术鉴定抗原表位 | 第38-43页 |
| ·材料和方法 | 第38-40页 |
| ·材料 | 第38页 |
| ·主要仪器设备 | 第38页 |
| ·肽库的生物筛选 | 第38页 |
| ·噬菌体的滴度测定 | 第38-39页 |
| ·扩增噬菌体 | 第39页 |
| ·噬菌体ELISA | 第39页 |
| ·测序模板制备及其序列测定 | 第39页 |
| ·短肽序列的推倒及表位分析 | 第39-40页 |
| ·结果 | 第40-41页 |
| ·淘选产率 | 第40页 |
| ·噬菌体ELISA 检测结果 | 第40页 |
| ·DNA 序列测定及表位分析 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 第六章 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 作者简历 | 第48页 |
