| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第1章 绪论 | 第9-17页 |
| 1.1 嗜热自养甲烷杆(Methanothermobacter.thermoautotrophicus) | 第9-10页 |
| 1.2 蛋白折叠 | 第10页 |
| 1.3 二硫键异构酶(protein disulfide isomerase, PDI) | 第10-14页 |
| 1.3.1 真核蛋白质二硫键异构酶 | 第11-14页 |
| 1.4 嗜热自养甲烷杆菌二硫键异构酶（MtPDI） | 第14-15页 |
| 1.5 定点诱变技术 | 第15页 |
| 1.6 研究内容与创新点 | 第15-17页 |
| 1.6.1 研究内容 | 第15-16页 |
| 1.6.2 实验创新点 | 第16-17页 |
| 第2章 非生物胁迫对嗜热自养甲烷杆菌形态和MtPDI蛋白表达的影响 | 第17-23页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-18页 |
| 2.1.1 菌种 | 第17页 |
| 2.1.2 主要仪器与设备 | 第17-18页 |
| 2.1.3 主要试剂及试剂盒 | 第18页 |
| 2.1.4 试剂配制 | 第18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-20页 |
| 2.2.1 嗜热自养甲烷杆菌培养基配制 | 第18-19页 |
| 2.2.2 嗜热自养甲烷杆菌进行热处理和盐胁迫处理 | 第19页 |
| 2.2.3 Western blot检测Mt PDI蛋白的表达 | 第19-20页 |
| 2.2.4 扫描电子显微样品的制备 | 第20页 |
| 2.3 结果与分析 | 第20-23页 |
| 2.3.1 嗜热自养甲烷杆菌经热胁迫和盐胁迫后MtPDI蛋白表达量 | 第20-21页 |
| 2.3.2 热处理和盐胁迫后嗜热自养甲烷杆菌的形态 | 第21-23页 |
| 第3章 嗜热自养甲烷杆菌二硫键异构酶(MtPDI)关键氨基酸位点突变体的构建 | 第23-32页 |
| 3.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 3.1.1 菌种 | 第23页 |
| 3.1.2 主要仪器与设备 | 第23页 |
| 3.1.3 生物信息软件及网络资源 | 第23页 |
| 3.1.4 主要试剂及试剂盒 | 第23页 |
| 3.1.5 主要试剂的配置 | 第23-24页 |
| 3.2 实验方法 | 第24-28页 |
| 3.2.1 pET-28a(+)质粒， pET-28a(+)-Mt PDI质粒提取 | 第24-25页 |
| 3.2.2 大肠杆菌DH5α 感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| 3.2.3 嗜热自养甲烷杆菌二硫键异构酶(MtPDI)关键氨基酸位点突变体的构建 | 第26-28页 |
| 3.3 结果与分析 | 第28-32页 |
| 3.3.1 采用环状诱变法对MtPDI基因进行定点突变PCR结果 | 第28-29页 |
| 3.3.2 MtPDI基因PCR扩增产物割胶回收电泳图 | 第29页 |
| 3.3.3 MtPDI突变体基因序列比对图 | 第29-32页 |
| 第4章 嗜热自养甲烷杆菌二硫键异构酶(Mt PDI) 关键氨基酸位点突变体原核表达 | 第32-39页 |
| 4.1 实验材料 | 第32-33页 |
| 4.1.1 实验材料及菌种 | 第32页 |
| 4.1.2 主要仪器设备 | 第32页 |
| 4.1.3 主要试剂及试剂盒 | 第32页 |
| 4.1.4 主要试剂的配制 | 第32-33页 |
| 4.2 实验方法 | 第33-37页 |
| 4.2.1 大肠杆菌Rosetta (DE3)感受态制备 | 第33页 |
| 4.2.2 MtPDI关键氨基酸位点突变体转化 | 第33页 |
| 4.2.3 MtPDI突变体原核诱导表达 | 第33-34页 |
| 4.2.4 MtPDI突变体表达产物存在形式的检测 | 第34页 |
| 4.2.5 MtPDI突变体蛋白质纯化 | 第34-35页 |
| 4.2.6 SDS-PAGE电泳检测Ni柱纯化后的MtPDI突变体蛋白质 | 第35-37页 |
| 4.3 结果与分析 | 第37-39页 |
| 4.3.1 MtPDI突变体表达产物存在形式的检测 | 第37-38页 |
| 4.3.2 二硫键异构酶(Mt PDI)突变体的蛋白质纯化 | 第38-39页 |
| 第5章 体外检测嗜热自养甲烷杆菌二硫键异构酶（MtPDI）突变体酶活性 | 第39-43页 |
| 5.1 实验材料 | 第39-40页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第39页 |
| 5.1.2 主要设备 | 第39页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第39页 |
| 5.1.4 主要试剂的配制 | 第39-40页 |
| 5.2 实验方法 | 第40页 |
| 5.2.1 MtPDI突变体还原酶活性测定 | 第40页 |
| 5.2.2 MtPDI突变体分子伴侣活性的测定 | 第40页 |
| 5.3 结果与分析 | 第40-43页 |
| 5.3.1 MtPDI突变体还原酶活性 | 第40-41页 |
| 5.3.2 MtPDI突变体分子伴侣活性 | 第41-43页 |
| 第6章 嗜热自养甲烷杆菌（MtPDI）突变体对E.coli的耐受性的分析 | 第43-48页 |
| 6.1 实验材料 | 第43-44页 |
| 6.1.1 实验菌种 | 第43页 |
| 6.1.2 主要仪器与设备 | 第43页 |
| 6.1.3 主要试剂及试剂盒 | 第43页 |
| 6.1.4 主要试剂的配制 | 第43-44页 |
| 6.2 实验方法 | 第44-46页 |
| 6.2.1 二硫键异构酶(Mt PDI)关键氨基酸位点各突变体的质粒提取 | 第44页 |
| 6.2.2 提取质粒的电泳检测 | 第44页 |
| 6.2.3 二硫键异构酶(Mt PDI)关键氨基酸位点各突变体的质粒转化Rosetta (DE3) | 第44-45页 |
| 6.2.4 MtPDI突变体对E.coli热耐受性的分析 | 第45页 |
| 6.2.5 MtPDI突变体对E.coli盐耐受性的分析 | 第45-46页 |
| 6.3 结果与分析 | 第46-48页 |
| 6.3.1 MtPDI突变体对E.coli热耐受性的分析 | 第46页 |
| 6.3.2 MtPDI突变体对E.coli盐耐受性的分析 | 第46-48页 |
| 第7章 结论 | 第48-51页 |
| 7.1 结论 | 第48-50页 |
| 7.1.1 非生物胁迫对嗜热自养甲烷杆菌二硫键异构酶（MtPDI）蛋白表达的影响 | 第48页 |
| 7.1.2 嗜热自养甲烷杆菌（MtPDI）关键氨基酸位点突变体的构建 | 第48页 |
| 7.1.3 嗜热自养甲烷杆菌（MtPDI）突变体蛋白质纯化 | 第48-49页 |
| 7.1.4 体外检测嗜热自养甲烷杆菌二硫键异构酶（MtPDI）突变体酶活性测定 | 第49页 |
| 7.1.5 嗜热自养甲烷杆菌二硫键异构酶（MtPDI）突变体对E.coli的耐受性的分析 | 第49-50页 |
| 7.2 讨论 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第57页 |
