| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 缩略语表 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-32页 |
| 1 前言 | 第14-15页 |
| 2 肝脏的基本结构和功能 | 第15-17页 |
| 2.1 肝脏的基本结构 | 第15-16页 |
| 2.2 肝脏的功能 | 第16-17页 |
| 2.2.1 糖异生 | 第16-17页 |
| 2.2.2 尿素循环 | 第17页 |
| 3 肝脏糖异生调控研究 | 第17-19页 |
| 3.1 营养与激素对糖异生的调控作用 | 第17-18页 |
| 3.2 转录因子对糖异生的调控作用 | 第18-19页 |
| 4 肝脏尿素循环调控研究进展 | 第19-30页 |
| 4.1 pH对尿素循环的调控 | 第19-20页 |
| 4.2 内分泌激素对尿素循环的调控 | 第20-22页 |
| 4.2.1 胰高血糖素 | 第20-21页 |
| 4.2.2 糖皮质激素 | 第21页 |
| 4.2.3 其他内分泌激素 | 第21-22页 |
| 4.3 去乙酰化酶对尿素循环的调控 | 第22-28页 |
| 4.3.1 Sirtuins去乙酰化酶家族 | 第22-27页 |
| 4.3.1.1 SIRT1、SIRT6和SIRT7的功能 | 第24-25页 |
| 4.3.1.2 SIRT2的功能 | 第25页 |
| 4.3.1.3 线粒体SIRT3、SIRT4和SIRT5的功能 | 第25-27页 |
| 4.3.2 SIRT3与鸟氨酸氨甲酰基转移酶OTC | 第27页 |
| 4.3.3 SIRT5与氨甲酰磷酸合成酶CPS1 | 第27-28页 |
| 4.4 营养素对尿素循环的调控 | 第28-30页 |
| 5 猪原代肝细胞的分离与应用 | 第30页 |
| 6 研究的目的意义 | 第30-32页 |
| 第二章 胰高血糖素对猪肝细胞PGC-1α和尿素循环的作用 | 第32-47页 |
| 1 前言 | 第32页 |
| 2 材料及仪器 | 第32-41页 |
| 2.1 试验动物 | 第32页 |
| 2.2 试验材料 | 第32-33页 |
| 2.3 仪器及设备 | 第33页 |
| 2.4 主要溶液及其配置 | 第33-35页 |
| 2.5 仔猪原代肝细胞分离与培养方法 | 第35-36页 |
| 2.5.1 仔猪原代肝细胞的分离 | 第35页 |
| 2.5.2 细胞计数 | 第35-36页 |
| 2.5.3 猪原代肝细胞的培养 | 第36页 |
| 2.5.4 猪原代肝细胞的处理与收集 | 第36页 |
| 2.6 荧光定量PCR检测 | 第36-39页 |
| 2.6.1 RNA提取 | 第36-37页 |
| 2.6.2 RNA反转录为cDNA | 第37-38页 |
| 2.6.3 定量PCR | 第38-39页 |
| 2.6.3.1 引物设计 | 第38-39页 |
| 2.6.3.2 定量PCR反应 | 第39页 |
| 2.7 蛋白表达量的检测 | 第39-41页 |
| 2.7.1 蛋白提取 | 第39页 |
| 2.7.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第39-41页 |
| 2.8 尿素和葡萄糖的测定 | 第41页 |
| 2.9 数据处理 | 第41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-44页 |
| 3.1 猪原代肝细胞的分离与培养 | 第41-42页 |
| 3.2 胰高血糖素对仔猪原代肝细胞尿素循环的影响 | 第42-44页 |
| 3.2.1 胰高血糖素对尿素循环相关基因的影响 | 第42-44页 |
| 3.2.2 胰高血糖素对葡萄糖和尿素浓度的影响 | 第44页 |
| 4 讨论 | 第44-47页 |
| 第三章 PGC-1α对肝细胞SIRT3和SIRT5表达及OTC和CPS1酶活的作用 | 第47-61页 |
| 1 前言 | 第47页 |
| 2 材料与方法 | 第47-54页 |
| 2.1 试验细胞 | 第47页 |
| 2.2 试验材料 | 第47-48页 |
| 2.2.1 试验试剂 | 第47-48页 |
| 2.2.2 试剂耗材 | 第48页 |
| 2.3 细胞复苏 | 第48页 |
| 2.4 细胞传代 | 第48页 |
| 2.5 细胞冻存 | 第48-49页 |
| 2.6 猪PGC-1α过表达载体的构建 | 第49-53页 |
| 2.6.1 RNA提取 | 第49页 |
| 2.6.2 RNA反转录 | 第49页 |
| 2.6.3 猪PGC-1α基因CDS序列的扩增 | 第49-50页 |
| 2.6.4 PCR产物胶回收 | 第50页 |
| 2.6.5 T载体连接及转化 | 第50页 |
| 2.6.6 阳性克隆的筛选及测序 | 第50-51页 |
| 2.6.7 碱裂解法提取重组质粒DNA | 第51页 |
| 2.6.8 构建表达质粒 | 第51-52页 |
| 2.6.9 转化及阳性克隆筛选 | 第52页 |
| 2.6.10 提取去内毒素质粒以及真核表达载体的双酶切鉴定 | 第52-53页 |
| 2.6.11 接种与转染 | 第53页 |
| 2.6.12 PGC-1α过表达的HepG2细胞的处理 | 第53页 |
| 2.7 乙酰化抗体免疫共沉淀（Immunoprecipitation，IP） | 第53-54页 |
| 2.8 代谢酶活的测定 | 第54页 |
| 2.9 尿素和葡萄糖的测定 | 第54页 |
| 2.10 数据分析 | 第54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-58页 |
| 3.1 PGC-1α过表达对尿素循环关键基因的影响 | 第54-57页 |
| 3.1.1 猪PGC-1α的真核表达载体的构建及双酶切鉴定 | 第54-55页 |
| 3.1.2 PGC-1α过表达效果 | 第55页 |
| 3.1.3 PGC-1α过表达对尿素生成通路上相关基因的影响 | 第55-56页 |
| 3.1.4 PGC-1α过表达对OTC和CPS1乙酰化水平和酶活性的影响433.2 PGC-1α过表达对葡萄糖和尿素浓度的影响 | 第56-57页 |
| 3.2 PGC-1α过表达对葡萄糖和尿素浓度的影响 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 5 小结 | 第60-61页 |
| 第四章 结语 | 第61-62页 |
| 1 成果与结论 | 第61页 |
| 2 创新点 | 第61页 |
| 3 不足与展望 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-73页 |
| 附录 研究生在读期间发表的主要研究论文 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
