| 摘要 | 第7-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-19页 |
| 1. 灰葡萄孢研究进展 | 第11-18页 |
| 1.1 灰葡萄孢的危害 | 第11页 |
| 1.2 灰葡萄孢的分类和习性 | 第11-12页 |
| 1.3 灰葡萄孢的病害循环 | 第12-13页 |
| 1.4 灰葡萄孢的致病因子 | 第13-17页 |
| 1.4.1 侵入寄主的表皮细胞 | 第13-14页 |
| 1.4.2 杀死寄主的组织细胞 | 第14-15页 |
| 1.4.3 分解寄主组织并转化成自身物质 | 第15-16页 |
| 1.4.4 信号转导因子 | 第16-17页 |
| 1.5 灰霉病的防治 | 第17-18页 |
| 2. 研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 灰葡萄孢基因的敲除和互补 | 第19-37页 |
| 1. 实验材料 | 第19-20页 |
| 1.1 菌株 | 第19页 |
| 1.2 培养基 | 第19页 |
| 1.3 载体 | 第19页 |
| 1.4 试剂 | 第19-20页 |
| 1.5 生物酶 | 第20页 |
| 1.6 实验仪器 | 第20页 |
| 2. 实验方法 | 第20-27页 |
| 2.1 基因的获得 | 第20页 |
| 2.2 基因表达量分析 | 第20-21页 |
| 2.2.1 总RNA提取 | 第20-21页 |
| 2.2.2 cDNA合成 | 第21页 |
| 2.2.3 RT-PCR检测基因表达 | 第21页 |
| 2.3 基因敲除转化子的获得 | 第21-24页 |
| 2.3.1 同源重组原理 | 第21页 |
| 2.3.2 基因组DNA的提取 | 第21页 |
| 2.3.3 同源重组片段的获得 | 第21-23页 |
| 2.3.4 PEG介导的灰葡萄孢原生质体转化 | 第23-24页 |
| 2.4 灰葡萄孢基因敲除转化子的验证 | 第24-25页 |
| 2.4.1 基因敲除转化子的PCR验证 | 第24-25页 |
| 2.4.2 敲除转化子的RT-PCR验证 | 第25页 |
| 2.5 基因互补转化子的获得与验证 | 第25-27页 |
| 2.5.1 互补载体的构建 | 第25页 |
| 2.5.2 农杆菌介导的灰葡萄孢转化 | 第25-26页 |
| 2.5.3 BC1G_03293 基因互补转化子的验证 | 第26-27页 |
| 3. 试验结果与分析 | 第27-35页 |
| 3.1 灰葡萄孢中BC1G_00689 和BC1G_03293 基因序列分析 | 第27-28页 |
| 3.2 灰葡萄孢基因BC1G_00689 和BC1G_03293 的表达模式分析 | 第28-29页 |
| 3.3 灰葡萄孢基因BC1G_00689 和BC1G_03293 转化子的获得及验证 | 第29-35页 |
| 3.3.1 BC1G_00689 敲除转化子的获得 | 第29-31页 |
| 3.3.2 BC1G_03293 敲除转化子的获得 | 第31-34页 |
| 3.3.3 BC1G_03293 互补转化子的获得 | 第34-35页 |
| 4. 小结与讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 灰葡萄孢中BC1G_00689，BC1G_03293 基因功能的初步研究 | 第37-52页 |
| 1 试验材料 | 第37-38页 |
| 1.1 试验菌株 | 第37页 |
| 1.2 培养基 | 第37-38页 |
| 2 试验方法 | 第38-39页 |
| 2.1 菌丝生长速度测定 | 第38页 |
| 2.2 转化子菌丝尖端形态 | 第38页 |
| 2.3 转化子产孢量测定 | 第38页 |
| 2.4 转化子致病力测定 | 第38页 |
| 2.5 转化子菌落形态观察 | 第38-39页 |
| 2.6 转化子菌核产量测定 | 第39页 |
| 2.7 转化子分生孢子萌发率的测定 | 第39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-50页 |
| 3.1 BC1G_00689 敲除突变体的表型分析 | 第39-43页 |
| 3.1.1 BC1G_00689 敲除转化子菌丝生长速度 | 第39-40页 |
| 3.1.2 BC1G_00689 敲除转化子菌丝尖端形态 | 第40页 |
| 3.1.3 BC1G_00689 敲除转化子分生孢子产生情况 | 第40-41页 |
| 3.1.4 BC1G_00689 敲除转化子的致病力测定 | 第41-42页 |
| 3.1.5 BC1G_00689 敲除转化子的菌落形态及菌核产生情况 | 第42-43页 |
| 3.2 BC1G_03293 敲除突变体的表型分析 | 第43-50页 |
| 3.2.1 BC1G_03293 敲除转化子菌丝生长速度 | 第43-45页 |
| 3.2.2 BC1G_03293 敲除转化子菌丝尖端形态 | 第45页 |
| 3.2.3 BC1G_03293 转化子分生孢子产生情况 | 第45-46页 |
| 3.2.4 BC1G_03293 敲除转化子的致病力测定 | 第46-47页 |
| 3.2.5 BC1G_03293 的转化子菌落形态和菌核干重统计 | 第47-49页 |
| 3.2.6 BC1G_03293 转化子的分生孢子萌发率的测定 | 第49-50页 |
| 4 小结与讨论 | 第50-52页 |
| 总结与展望 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
