| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第12-28页 |
| 1.1 真菌耐药性机制研究进展 | 第12-20页 |
| 1.1.1 抗真菌剂作用机理及抗药性的产生 | 第12-15页 |
| 1.1.2 与CYP51相关的抗性机制 | 第15-17页 |
| 1.1.3 与药泵相关的抗性机制 | 第17-18页 |
| 1.1.4 与转录因子相关的抗性机制 | 第18-20页 |
| 1.2 CYP51的研究进展 | 第20-26页 |
| 1.2.1 CYP51研究历程 | 第20页 |
| 1.2.2 CYP51功能概况 | 第20-22页 |
| 1.2.3 CYP51序列保守性特征 | 第22-24页 |
| 1.2.4 CYP51晶体结构研究分析 | 第24-26页 |
| 1.3 细胞色素P450的异源表达 | 第26-27页 |
| 1.3.1 细胞色素P450异源表达系统 | 第26页 |
| 1.3.2 细胞色素P450异源表达优化 | 第26-27页 |
| 1.4 选题研究目的、内容及意义 | 第27-28页 |
| 2 实验材料与方法 | 第28-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第28页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第28页 |
| 2.1.2 主要试剂和DMIs抗真菌剂 | 第28页 |
| 2.1.3 酶及实验试剂盒 | 第28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-35页 |
| 2.2.1 柑橘致病真菌的分离 | 第28-29页 |
| 2.2.2 青霉菌菌株的敏感性检测 | 第29页 |
| 2.2.3 青霉菌的抑霉唑抗性检测 | 第29页 |
| 2.2.4 真菌基因组DNA的提取 | 第29-30页 |
| 2.2.5 RNA提取及RT-PCR | 第30页 |
| 2.2.6 PiCYP51B基因及其上下游调控序列的克隆 | 第30-32页 |
| 2.2.7 PiCYP51A/B基因及其上游序列的检测 | 第32-33页 |
| 2.2.8 重组质粒的诱导表达和SDS-PAGE分析 | 第33-34页 |
| 2.2.9 生物信息学对基因序列的分析 | 第34页 |
| 2.2.10 意大利青霉CYP51B的同源模建 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-61页 |
| 3.1 意大利青霉菌的分离纯化及抗性分析 | 第35-37页 |
| 3.1.1 意大利青霉菌的分离纯化与鉴定 | 第35页 |
| 3.1.2 意大利青霉对抑霉唑(Imazalil)的敏感性和EC_(50)分析 | 第35-37页 |
| 3.2 PiCYP51B基因及其侧翼序列的克隆与序列分析 | 第37-45页 |
| 3.2.1 PiCYP51B基因及其侧翼序列的克隆 | 第37-38页 |
| 3.2.2 PiCYP51B基因及其侧翼序列的分析 | 第38-43页 |
| 3.2.3 PiCYP51B的同源模建分析 | 第43-45页 |
| 3.3 意大利青霉的抗性机制探究 | 第45-50页 |
| 3.3.1 PiCYP51A/B基因与抑霉唑抗性的关系 | 第45-47页 |
| 3.3.2 PiCYP51A/B基因的上游序列分析 | 第47-50页 |
| 3.4 意大利青霉PiCYP51A全长及其突变体的克隆表达 | 第50-61页 |
| 3.4.1 PiCYP51A全长基因的克隆及重组质粒的构建 | 第50-55页 |
| 3.4.2 重组PiCYP51A蛋白的诱导表达及SDS-PAGE分析 | 第55-56页 |
| 3.4.3 意大利青霉菌PiCYP51A跨膜结构分析 | 第56-58页 |
| 3.4.4 意大利青霉菌CYP51A突变体重组质粒的构建与表达 | 第58-61页 |
| 4 讨论 | 第61-64页 |
| 参考文献 | 第64-73页 |
| 硕士期间发表的文章 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
