| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第11-23页 |
| 1.1 被子植物花的起源 | 第11-12页 |
| 1.2 MADS-box基因与被子植物 | 第12-14页 |
| 1.2.1 基因简介 | 第12页 |
| 1.2.2 基因历史 | 第12页 |
| 1.2.3 基因结构与类型 | 第12-13页 |
| 1.2.4 基因生物功能 | 第13-14页 |
| 1.3 MADS-box基因与裸子植物 | 第14-18页 |
| 1.4 种子植物MADS-box基因系统发育概述 | 第18-20页 |
| 1.5 MADS-box基因花起源假设 | 第20-21页 |
| 1.6 实时荧光定量PCR内参基因筛选 | 第21-22页 |
| 1.7 本研究目的意义 | 第22-23页 |
| 2 实验材料与方法 | 第23-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第23-24页 |
| 2.1.2 试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.3 仪器 | 第25页 |
| 2.1.4 分析软件 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-36页 |
| 2.2.1 转录组数据挖掘候选基因 | 第25-26页 |
| 2.2.1.1 本地CMD命令行Blastn、Blastx和Blastp分析 | 第25-26页 |
| 2.2.1.2 HHMER模型同源序列搜索 | 第26页 |
| 2.2.1.3 验证搜索结果 | 第26页 |
| 2.2.2 候选基因引物设计 | 第26-27页 |
| 2.2.2.1 普通PCR引物 | 第26页 |
| 2.2.2.2 实时荧光定量PCR引物 | 第26-27页 |
| 2.2.3 总RNA提取 | 第27页 |
| 2.2.4 RNA纯度及完整性检测 | 第27-28页 |
| 2.2.5 反转录cDNA第一条链 | 第28-29页 |
| 2.2.5.1 基因组DNA去除反应 | 第28页 |
| 2.2.5.2 反转录反应 | 第28-29页 |
| 2.2.6 目标片段PCR扩增 | 第29页 |
| 2.2.7 PCR产物凝胶回收 | 第29-30页 |
| 2.2.8 载体克隆目的片段 | 第30-32页 |
| 2.2.8.1 配置LB培养基 | 第30-31页 |
| 2.2.8.2 连接 | 第31页 |
| 2.2.8.3 感受态细胞制备 | 第31页 |
| 2.2.8.4 转化 | 第31-32页 |
| 2.2.9 质粒抽提及测序 | 第32页 |
| 2.2.10 测序结果确认 | 第32-33页 |
| 2.2.11 内参基因荧光定量PCR | 第33页 |
| 2.2.12 内参基因筛选 | 第33-35页 |
| 2.2.12.1 软件筛选最稳定内参基因 | 第34-35页 |
| 2.2.12.2 最稳定内参基因评估 | 第35页 |
| 2.2.13 构建MADS-box基因树 | 第35页 |
| 2.2.14 MADS-box基因荧光定量PCR | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-56页 |
| 3.1 转录组数据目标基因挖掘 | 第36-38页 |
| 3.1.1 MADSA-box基因 | 第36-37页 |
| 3.1.2 内参基因 | 第37-38页 |
| 3.2 越南篦齿苏铁总RNA提取 | 第38-39页 |
| 3.3 目标基因引物设计、克隆与序列确定 | 第39-44页 |
| 3.3.1 MADS-box基因 | 第39-41页 |
| 3.3.2 内参基因 | 第41-44页 |
| 3.4 MADS-box基因系统发育树构建 | 第44-47页 |
| 3.5 稳定内参基因筛选 | 第47-53页 |
| 3.5.1 荧光定量PCR、引物设计和Ct值获取 | 第47-48页 |
| 3.5.2 软件分析内参基因稳定性 | 第48-51页 |
| 3.5.3 稳定内参基因评估 | 第51-53页 |
| 3.6 MADS-box基因表达模式分析 | 第53-56页 |
| 4 讨论与结论 | 第56-66页 |
| 4.1 内参基因筛选 | 第56-58页 |
| 4.1.1 内参基因的稳定性 | 第56-57页 |
| 4.1.2 最佳内参基因个数 | 第57-58页 |
| 4.1.3 稳定内参基因评估 | 第58页 |
| 4.2 MADS-box基因 | 第58-64页 |
| 4.2.1 MIKCC型 | 第58-63页 |
| 4.2.1.1 AG、DEF/GLO、AGL6亚族 | 第59-61页 |
| 4.2.1.2 花起源分子机制 | 第61-62页 |
| 4.2.1.3 其他亚族 | 第62-63页 |
| 4.2.2 Type I型 | 第63-64页 |
| 4.3 结论 | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 附录 | 第76页 |