| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 第一章 前言 | 第16-32页 |
| 1.1 尖孢镰刀菌概述 | 第16-17页 |
| 1.2 黄瓜枯萎病(F.oxyspoum f.sp.cucumerinum)概述 | 第17-21页 |
| 1.2.1 黄瓜枯萎病的症状 | 第17页 |
| 1.2.2 黄瓜枯萎病的病原 | 第17-18页 |
| 1.2.3 黄瓜枯萎病的侵染循环 | 第18-19页 |
| 1.2.4 黄瓜枯萎病的防治 | 第19-21页 |
| 1.2.4.1 化学防治 | 第19-20页 |
| 1.2.4.2 农业防治 | 第20页 |
| 1.2.4.3 生物防治 | 第20-21页 |
| 1.3 尖孢镰刀菌致病机理 | 第21-23页 |
| 1.3.1 导管堵塞假说 | 第21页 |
| 1.3.2 毒素作用假说 | 第21-22页 |
| 1.3.3 信号传导系统 | 第22页 |
| 1.3.4 细胞壁降解 | 第22页 |
| 1.3.5 克服植物的防御系统 | 第22-23页 |
| 1.4 生物膜概述 | 第23-30页 |
| 1.4.1 生物膜定义 | 第23页 |
| 1.4.3 生物膜形成影响因素 | 第23-24页 |
| 1.4.4 真菌生物膜 | 第24-25页 |
| 1.4.5 丝状真菌生物膜 | 第25-26页 |
| 1.4.6 丝状真菌的群体感应 | 第26-27页 |
| 1.4.7 生物膜的模型 | 第27-28页 |
| 1.4.8 生物膜与农业生产 | 第28页 |
| 1.4.9 生物膜耐受性 | 第28-30页 |
| 1.5 丝绒蛋白 | 第30页 |
| 1.6 丝状真菌基因敲除 | 第30-31页 |
| 1.7 本研究的目的与意义 | 第31-32页 |
| 第二章 病原菌生物膜的形成及敏感性分析 | 第32-47页 |
| 2.1 材料与方法 | 第32-38页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第32页 |
| 2.1.2 供试培养基 | 第32-33页 |
| 2.1.3 溶液的配制 | 第33-34页 |
| 2.1.4 供试试剂与药剂 | 第34页 |
| 2.1.5 生物膜的形成 | 第34-35页 |
| 2.1.6 环境因素对Foc-GD形成生物膜的影响 | 第35-36页 |
| 2.1.7 Foc-GD对环境压力的敏感性分析 | 第36-37页 |
| 2.1.7.1 对高温的敏感性 | 第36页 |
| 2.1.7.2 对低温的敏感性 | 第36页 |
| 2.1.7.3 对紫外线照射的敏感性 | 第36-37页 |
| 2.1.7.4 对杀菌剂的敏感性 | 第37页 |
| 2.1.8 Foc-GD生物膜结构的观察 | 第37-38页 |
| 2.1.8.1 生物膜的培养 | 第37页 |
| 2.1.8.2 荧光染料的配制 | 第37页 |
| 2.1.8.3 生物膜细胞染色 | 第37页 |
| 2.1.8.4 生物膜结构观察 | 第37-38页 |
| 2.2 结果与分析 | 第38-45页 |
| 2.2.1 Foc-GD生物膜的发育 | 第38页 |
| 2.2.2 Foc-GD生物膜形成的物理影响因素 | 第38-40页 |
| 2.2.3 Foc-GD生物膜与浮游孢子对环境压力的敏感性 | 第40-43页 |
| 2.2.4 F oxysporum f.sp.cucumerinum生物膜结构 | 第43-45页 |
| 2.3 讨论 | 第45-47页 |
| 第三章 丝绒蛋白对黄瓜枯萎病菌生物膜形成的调控 | 第47-73页 |
| 3.1 材料与方法 | 第48-60页 |
| 3.1.1 供试菌株 | 第48页 |
| 3.1.2 供试培养基及培养条件 | 第48-49页 |
| 3.1.3 丝绒蛋白基因生物信息学分析 | 第49页 |
| 3.1.4 丝绒蛋白FocVel1基因的克隆 | 第49-50页 |
| 3.1.4.1 DNA提取 | 第49页 |
| 3.1.4.2 FocVel1基因克隆及测序 | 第49-50页 |
| 3.1.5 丝绒蛋白FocVel1基因的表达 | 第50-51页 |
| 3.1.5.1 RNA提取及检测 | 第50-51页 |
| 3.1.5.2 RNA的反转录 | 第51页 |
| 3.1.5.3 FocVel1基因RT-PCR分析 | 第51页 |
| 3.1.6 FocVell基因的敲除及回补 | 第51-58页 |
| 3.1.6.1 菌株基因组DNA提取 | 第51页 |
| 3.1.6.2 质粒提取 | 第51-52页 |
| 3.1.6.3 凝胶回收及DNA浓度检测 | 第52-53页 |
| 3.1.6.4 FocVel1基因敲除载体构建 | 第53-54页 |
| 3.1.6.5 原生质体的制备及转化 | 第54-55页 |
| 3.1.6.6 PCR和Southern blot杂交验证 | 第55-57页 |
| 3.1.6.7 FocVel1基因敲除突变体回补实验 | 第57页 |
| 3.1.6.8 突变体菌株菌株生物学特性分析 | 第57-58页 |
| 3.1.7 生物膜特征的比较 | 第58页 |
| 3.1.7.1 生物膜的培养 | 第58页 |
| 3.1.7.2 生物膜的定量及特征分析 | 第58页 |
| 3.1.8 显微观察 | 第58-59页 |
| 3.1.9 致病性分析 | 第59-60页 |
| 3.1.9.1 孢子收集 | 第59页 |
| 3.1.9.2 黄瓜苗培养 | 第59-60页 |
| 3.1.9.3 接种黄瓜苗 | 第60页 |
| 3.1.9.4 致病性分析 | 第60页 |
| 3.1.10 数据统计 | 第60页 |
| 3.2 结果与分析 | 第60-70页 |
| 3.2.1 FocVel1的基因信息分析 | 第60-61页 |
| 3.2.2 FocVel1的表达 | 第61-62页 |
| 3.2.3 FocVel1的基因敲除与回补 | 第62-63页 |
| 3.2.3.1 基因敲除策略 | 第62-63页 |
| 3.2.3.2 突变体转化子筛选 | 第63页 |
| 3.2.3.3 Southern blot杂交验证 | 第63页 |
| 3.2.4 产孢量比较 | 第63-65页 |
| 3.2.5 菌落形态比较 | 第65页 |
| 3.2.6 对渗透压力和细胞破坏因子的敏感性 | 第65-66页 |
| 3.2.7 对生物膜发育的影响 | 第66-68页 |
| 3.2.8 对成熟生物膜结构的影响 | 第68页 |
| 3.2.9 致病性分析 | 第68-70页 |
| 3.3 讨论 | 第70-73页 |
| 第四章 黄瓜枯萎病菌在植株体内的生物膜的形成 | 第73-86页 |
| 4.1 材料与方法 | 第73-79页 |
| 4.1.1 供试菌株与载体 | 第73-74页 |
| 4.1.2 培养基及试剂配制 | 第74页 |
| 4.1.3 大肠杆菌DH5a转化 | 第74-75页 |
| 4.1.4 基因组DNA提取 | 第75页 |
| 4.1.5 转化菌株PCR验证 | 第75-76页 |
| 4.1.6 转化菌株Southern blot杂交验证 | 第76-77页 |
| 4.1.7 质粒提取 | 第77-78页 |
| 4.1.8 原生质体的制备及转化 | 第78-79页 |
| 4.1.9 原生质体对潮霉素的浓度筛选 | 第79页 |
| 4.1.10 转化株荧光遗传稳定性鉴定 | 第79页 |
| 4.1.11 生长速度及致病力比较 | 第79页 |
| 4.2 结果与分析 | 第79-83页 |
| 4.2.1 潮霉素浓度筛选 | 第79-80页 |
| 4.2.2 转化菌株荧光稳定性观察 | 第80页 |
| 4.2.3 转化菌株验证 | 第80-81页 |
| 4.2.4 生长速度及致病力比较 | 第81-82页 |
| 4.2.5 显微观察 | 第82-83页 |
| 4.3 讨论 | 第83-86页 |
| 第五章 总结 | 第86-89页 |
| 5.1 全文总结 | 第86-87页 |
| 5.2 论文的创新点 | 第87页 |
| 5.3 问题与展望 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-104页 |
| 致谢 | 第104-106页 |
| 附录 | 第106-107页 |
