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黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cucuifimViiiw)生物膜的形成及相关基因功能分析

摘要第4-7页
ABSTRACT第7-10页
第一章 前言第16-32页
    1.1 尖孢镰刀菌概述第16-17页
    1.2 黄瓜枯萎病(F.oxyspoum f.sp.cucumerinum)概述第17-21页
        1.2.1 黄瓜枯萎病的症状第17页
        1.2.2 黄瓜枯萎病的病原第17-18页
        1.2.3 黄瓜枯萎病的侵染循环第18-19页
        1.2.4 黄瓜枯萎病的防治第19-21页
            1.2.4.1 化学防治第19-20页
            1.2.4.2 农业防治第20页
            1.2.4.3 生物防治第20-21页
    1.3 尖孢镰刀菌致病机理第21-23页
        1.3.1 导管堵塞假说第21页
        1.3.2 毒素作用假说第21-22页
        1.3.3 信号传导系统第22页
        1.3.4 细胞壁降解第22页
        1.3.5 克服植物的防御系统第22-23页
    1.4 生物膜概述第23-30页
        1.4.1 生物膜定义第23页
        1.4.3 生物膜形成影响因素第23-24页
        1.4.4 真菌生物膜第24-25页
        1.4.5 丝状真菌生物膜第25-26页
        1.4.6 丝状真菌的群体感应第26-27页
        1.4.7 生物膜的模型第27-28页
        1.4.8 生物膜与农业生产第28页
        1.4.9 生物膜耐受性第28-30页
    1.5 丝绒蛋白第30页
    1.6 丝状真菌基因敲除第30-31页
    1.7 本研究的目的与意义第31-32页
第二章 病原菌生物膜的形成及敏感性分析第32-47页
    2.1 材料与方法第32-38页
        2.1.1 供试菌株第32页
        2.1.2 供试培养基第32-33页
        2.1.3 溶液的配制第33-34页
        2.1.4 供试试剂与药剂第34页
        2.1.5 生物膜的形成第34-35页
        2.1.6 环境因素对Foc-GD形成生物膜的影响第35-36页
        2.1.7 Foc-GD对环境压力的敏感性分析第36-37页
            2.1.7.1 对高温的敏感性第36页
            2.1.7.2 对低温的敏感性第36页
            2.1.7.3 对紫外线照射的敏感性第36-37页
            2.1.7.4 对杀菌剂的敏感性第37页
        2.1.8 Foc-GD生物膜结构的观察第37-38页
            2.1.8.1 生物膜的培养第37页
            2.1.8.2 荧光染料的配制第37页
            2.1.8.3 生物膜细胞染色第37页
            2.1.8.4 生物膜结构观察第37-38页
    2.2 结果与分析第38-45页
        2.2.1 Foc-GD生物膜的发育第38页
        2.2.2 Foc-GD生物膜形成的物理影响因素第38-40页
        2.2.3 Foc-GD生物膜与浮游孢子对环境压力的敏感性第40-43页
        2.2.4 F oxysporum f.sp.cucumerinum生物膜结构第43-45页
    2.3 讨论第45-47页
第三章 丝绒蛋白对黄瓜枯萎病菌生物膜形成的调控第47-73页
    3.1 材料与方法第48-60页
        3.1.1 供试菌株第48页
        3.1.2 供试培养基及培养条件第48-49页
        3.1.3 丝绒蛋白基因生物信息学分析第49页
        3.1.4 丝绒蛋白FocVel1基因的克隆第49-50页
            3.1.4.1 DNA提取第49页
            3.1.4.2 FocVel1基因克隆及测序第49-50页
        3.1.5 丝绒蛋白FocVel1基因的表达第50-51页
            3.1.5.1 RNA提取及检测第50-51页
            3.1.5.2 RNA的反转录第51页
            3.1.5.3 FocVel1基因RT-PCR分析第51页
        3.1.6 FocVell基因的敲除及回补第51-58页
            3.1.6.1 菌株基因组DNA提取第51页
            3.1.6.2 质粒提取第51-52页
            3.1.6.3 凝胶回收及DNA浓度检测第52-53页
            3.1.6.4 FocVel1基因敲除载体构建第53-54页
            3.1.6.5 原生质体的制备及转化第54-55页
            3.1.6.6 PCR和Southern blot杂交验证第55-57页
            3.1.6.7 FocVel1基因敲除突变体回补实验第57页
            3.1.6.8 突变体菌株菌株生物学特性分析第57-58页
        3.1.7 生物膜特征的比较第58页
            3.1.7.1 生物膜的培养第58页
            3.1.7.2 生物膜的定量及特征分析第58页
        3.1.8 显微观察第58-59页
        3.1.9 致病性分析第59-60页
            3.1.9.1 孢子收集第59页
            3.1.9.2 黄瓜苗培养第59-60页
            3.1.9.3 接种黄瓜苗第60页
            3.1.9.4 致病性分析第60页
        3.1.10 数据统计第60页
    3.2 结果与分析第60-70页
        3.2.1 FocVel1的基因信息分析第60-61页
        3.2.2 FocVel1的表达第61-62页
        3.2.3 FocVel1的基因敲除与回补第62-63页
            3.2.3.1 基因敲除策略第62-63页
            3.2.3.2 突变体转化子筛选第63页
            3.2.3.3 Southern blot杂交验证第63页
        3.2.4 产孢量比较第63-65页
        3.2.5 菌落形态比较第65页
        3.2.6 对渗透压力和细胞破坏因子的敏感性第65-66页
        3.2.7 对生物膜发育的影响第66-68页
        3.2.8 对成熟生物膜结构的影响第68页
        3.2.9 致病性分析第68-70页
    3.3 讨论第70-73页
第四章 黄瓜枯萎病菌在植株体内的生物膜的形成第73-86页
    4.1 材料与方法第73-79页
        4.1.1 供试菌株与载体第73-74页
        4.1.2 培养基及试剂配制第74页
        4.1.3 大肠杆菌DH5a转化第74-75页
        4.1.4 基因组DNA提取第75页
        4.1.5 转化菌株PCR验证第75-76页
        4.1.6 转化菌株Southern blot杂交验证第76-77页
        4.1.7 质粒提取第77-78页
        4.1.8 原生质体的制备及转化第78-79页
        4.1.9 原生质体对潮霉素的浓度筛选第79页
        4.1.10 转化株荧光遗传稳定性鉴定第79页
        4.1.11 生长速度及致病力比较第79页
    4.2 结果与分析第79-83页
        4.2.1 潮霉素浓度筛选第79-80页
        4.2.2 转化菌株荧光稳定性观察第80页
        4.2.3 转化菌株验证第80-81页
        4.2.4 生长速度及致病力比较第81-82页
        4.2.5 显微观察第82-83页
    4.3 讨论第83-86页
第五章 总结第86-89页
    5.1 全文总结第86-87页
    5.2 论文的创新点第87页
    5.3 问题与展望第87-89页
参考文献第89-104页
致谢第104-106页
附录第106-107页

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