| 摘要 | 第10-11页 |
| 英文摘要 | 第11页 |
| 符号说明 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| 1.1 牛呼吸道合胞体病毒概述 | 第13-17页 |
| 1.2 流行病学 | 第17-19页 |
| 1.3 诊断方法 | 第19-21页 |
| 1.4 BRSV疫苗的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.5 单克隆抗体研究进展 | 第22-23页 |
| 1.6 DAS-ELISA方法在检测病原中的应用 | 第23页 |
| 1.7 研究的目的与意义 | 第23-25页 |
| 第二章 牛呼吸道合胞体病毒G基因的原核表达 | 第25-41页 |
| 2.1 材料 | 第25-26页 |
| 2.2 方法 | 第26-32页 |
| 2.2.1 BRSV HJ株病毒液的活化 | 第26页 |
| 2.2.2 引物的设计与合成 | 第26-27页 |
| 2.2.3 BRSV病毒基因的提取 | 第27页 |
| 2.2.4 RT-PCR扩增 | 第27页 |
| 2.2.5 重组克隆质粒的构建及鉴定 | 第27-30页 |
| 2.2.6 重组表达质粒的构建及鉴定 | 第30页 |
| 2.2.7 目的基因在大肠杆菌中的表达 | 第30-31页 |
| 2.2.8 重组蛋白可溶性分析 | 第31页 |
| 2.2.9 重组蛋白的纯化 | 第31-32页 |
| 2.2.10 蛋白浓度测定 | 第32页 |
| 2.2.11 重组蛋白的Western blot鉴定 | 第32页 |
| 2.3 结果 | 第32-39页 |
| 2.3.1 BRSV病毒的增殖 | 第32页 |
| 2.3.2 BSRV G基因RT-PCR结果 | 第32-33页 |
| 2.3.3 重组克隆质粒的鉴定 | 第33-35页 |
| 2.3.4 重组表达质粒的鉴定 | 第35-36页 |
| 2.3.5 最佳诱导条件的确定 | 第36-37页 |
| 2.3.6 目的蛋白可溶性分析 | 第37-38页 |
| 2.3.7 目的蛋白的纯化 | 第38-39页 |
| 2.3.8 重组蛋白浓度鉴定 | 第39页 |
| 2.3.9 重组蛋白Western blot鉴定 | 第39页 |
| 2.4 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 牛呼吸道合胞体病毒G蛋白抗体的制备 | 第41-63页 |
| 3.1 材料 | 第41-42页 |
| 3.2 方法 | 第42-49页 |
| 3.2.1 兔免疫程序 | 第42-43页 |
| 3.2.2 多克隆抗体检测 | 第43-44页 |
| 3.2.3 多克隆抗体的纯化 | 第44页 |
| 3.2.4 多克隆抗体纯度的鉴定及其浓度的测定 | 第44-45页 |
| 3.2.5 杂交瘤细胞株的建立 | 第45-47页 |
| 3.2.6 杂交瘤细胞筛选和克隆化培养 | 第47页 |
| 3.2.7 杂交瘤细胞的冻存和复苏 | 第47-48页 |
| 3.2.8 杂交瘤细胞染色体分析 | 第48页 |
| 3.2.9 腹水的制备及纯化 | 第48页 |
| 3.2.10 单克隆抗体特异性检测 | 第48页 |
| 3.2.11 腹水效价及浓度的测定 | 第48-49页 |
| 3.3 结果 | 第49-59页 |
| 3.3.1 多克隆抗体检测 | 第49-51页 |
| 3.3.2 多克隆抗体的纯度鉴定及浓度测定结果 | 第51-52页 |
| 3.3.3 杂交瘤细胞株的建立结果 | 第52-54页 |
| 3.3.4 杂交瘤细胞的筛选和克隆化培养 | 第54-55页 |
| 3.3.5 细胞的冻存与复苏 | 第55页 |
| 3.3.6 杂交瘤细胞染色体分析 | 第55-56页 |
| 3.3.7 腹水纯化及浓度测定 | 第56-57页 |
| 3.3.8 单克隆抗体特异性检测 | 第57-59页 |
| 3.3.9 腹水效价检测 | 第59页 |
| 3.4 讨论 | 第59-63页 |
| 3.4.1 多克隆抗体制备 | 第59-60页 |
| 3.4.2 单克隆抗体制备 | 第60-63页 |
| 第四章 DAS-ELISA方法的建立 | 第63-77页 |
| 4.1 材料 | 第63页 |
| 4.2 方法 | 第63-65页 |
| 4.2.1 DAS-ELISA方法操作程序 | 第63页 |
| 4.2.2 DAS-ELISA反应条件的优化 | 第63-64页 |
| 4.2.3 临界值判定标准 | 第64-65页 |
| 4.2.4 特异性试验 | 第65页 |
| 4.2.5 重复性试验 | 第65页 |
| 4.2.6 灵敏性试验 | 第65页 |
| 4.2.7 DAS-ELISA与RT-PCR符合率试验 | 第65页 |
| 4.3 结果 | 第65-74页 |
| 4.3.1 DAS-ELISA方法的建立 | 第65-71页 |
| 4.3.2 临界值的确定 | 第71-72页 |
| 4.3.3 特异性试验结果 | 第72页 |
| 4.3.4 重复性试验结果 | 第72页 |
| 4.3.5 灵敏性试验结果 | 第72-73页 |
| 4.3.6 符合率试验 | 第73-74页 |
| 4.4 讨论 | 第74-77页 |
| 结论 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-89页 |
| 附录 | 第89-91页 |
| 致谢 | 第91-93页 |
| 个人简历 | 第93页 |