| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-25页 |
| 1.1 重组蛋白药物的市场概况 | 第11-14页 |
| 1.1.1 生物制药市场概况 | 第11-13页 |
| 1.1.2 重组蛋白药物及其市场概况 | 第13-14页 |
| 1.2 大肠杆菌表达系统 | 第14-17页 |
| 1.2.1 表达载体及其选择 | 第15-16页 |
| 1.2.2 宿主菌及其选择 | 第16页 |
| 1.2.3 pET表达系统 | 第16-17页 |
| 1.3 重组大肠杆菌的高密度发酵 | 第17-18页 |
| 1.3.1 培养基成分 | 第17页 |
| 1.3.2 培养条件 | 第17页 |
| 1.3.3 代谢抑制性副产物的积累 | 第17页 |
| 1.3.4 营养物质的合理流加 | 第17-18页 |
| 1.4 包涵体及其体外复性技术 | 第18-21页 |
| 1.4.1 包涵体的形成原因 | 第18-19页 |
| 1.4.2 包涵体体外复性技术 | 第19-20页 |
| 1.4.3 包涵体复性效果的检测方法 | 第20-21页 |
| 1.5 常用的重组蛋白纯化方法 | 第21-23页 |
| 1.5.1 沉淀法 | 第22页 |
| 1.5.2 层析法(chromatography) | 第22-23页 |
| 1.5.3 电泳法(electrophoresis) | 第23页 |
| 1.6 本课题的目的、意义和主要内容 | 第23-25页 |
| 第二章 重组人表皮生长因子hEGF的非融合型异源表达 | 第25-37页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 实验材料 | 第25-29页 |
| 2.2.1 菌株与质粒 | 第25页 |
| 2.2.2 仪器设备 | 第25-27页 |
| 2.2.3 实验试剂 | 第27页 |
| 2.2.4 常用试剂的配制方法 | 第27-28页 |
| 2.2.5 培养基 | 第28页 |
| 2.2.6 培养方法 | 第28-29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-32页 |
| 2.3.1 异源表达hEGF重组菌的构建 | 第29-31页 |
| 2.3.2 重组大肠杆菌蛋白表达验证 | 第31-32页 |
| 2.3.3 重组大肠杆菌培养条件的简单优化 | 第32页 |
| 2.4 结果与分析 | 第32-36页 |
| 2.4.1 hEGF目的基因的扩增 | 第32-33页 |
| 2.4.2 阳性克隆的菌落PCR验证 | 第33页 |
| 2.4.3 阳性克隆菌的测序分析 | 第33-34页 |
| 2.4.4 重组蛋白诱导表达结果 | 第34页 |
| 2.4.5 重组大肠杆菌诱导条件的简单优化 | 第34-36页 |
| 2.5 本章小结 | 第36-37页 |
| 第三章 包涵体hEGF的变性、复性以及分离纯化 | 第37-56页 |
| 3.1 引言 | 第37页 |
| 3.2 实验材料 | 第37-39页 |
| 3.2.1 菌种 | 第37页 |
| 3.2.2 仪器设备 | 第37页 |
| 3.2.3 实验试剂 | 第37-38页 |
| 3.2.4 常用溶剂的配制方法 | 第38-39页 |
| 3.2.5 培养基 | 第39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-44页 |
| 3.3.1 7L发酵罐高密度发酵表达hEGF | 第39页 |
| 3.3.2 重组hEGF蛋白的收集 | 第39-40页 |
| 3.3.3 包涵体的洗涤与变性 | 第40页 |
| 3.3.4 包涵体的复性 | 第40页 |
| 3.3.5 重组hEGF的纯化 | 第40-42页 |
| 3.3.6 蛋白浓度测定、蛋白纯度及纯化回收率的计算 | 第42-44页 |
| 3.3.7 重组hEGF生物活性的验证 | 第44页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第44-55页 |
| 3.4.1 重组hEGF包涵体蛋白的收集 | 第44页 |
| 3.4.2 包涵体洗涤与变性 | 第44-46页 |
| 3.4.3 包涵体复性 | 第46页 |
| 3.4.4 重组hEGF的纯化 | 第46-53页 |
| 3.4.5 hEGF纯度及纯化回收率分析 | 第53-54页 |
| 3.4.6 重组hEGF生物活性的验证 | 第54-55页 |
| 3.5 本章小结 | 第55-56页 |
| 第四章 HIV辅助T细胞疫苗包涵体复性纯化工艺的研究 | 第56-63页 |
| 4.1 引言 | 第56页 |
| 4.2 实验材料 | 第56-57页 |
| 4.3 实验方法 | 第57-58页 |
| 4.4 实验结果与分析 | 第58-62页 |
| 4.5 本章小结 | 第62-63页 |
| 第五章 总结与展望 | 第63-66页 |
| 5.1 课题总结 | 第63-64页 |
| 5.2 展望 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 科研成果 | 第74页 |
