| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略表 | 第13-15页 |
| 1 文献综述 | 第15-34页 |
| 1.1 弓形虫概述 | 第15-18页 |
| 1.1.1 弓形虫及弓形虫病 | 第15-16页 |
| 1.1.2 弓形虫的生活史 | 第16-17页 |
| 1.1.3 弓形虫的宿主 | 第17-18页 |
| 1.2 弓形虫感染宿主机制的研究进展 | 第18-21页 |
| 1.2.1 弓形虫入侵宿主细胞的过程 | 第18-20页 |
| 1.2.2 弓形虫对宿主细胞的调节 | 第20-21页 |
| 1.3 弓形虫微线体蛋白的研究进展 | 第21-28页 |
| 1.3.1 MIC1/MIC4/MIC6 复合物 | 第25页 |
| 1.3.2 MIC2/M2AP复合物 | 第25-26页 |
| 1.3.3 MIC3/MIC8 复合物 | 第26页 |
| 1.3.4 AMA1 以及移动接点复合物 | 第26-27页 |
| 1.3.5 其他微线体蛋白 | 第27-28页 |
| 1.4 弓形虫蛋白与宿主蛋白相互作用的研究进展 | 第28-29页 |
| 1.5 蛋白质互作技术的研究进展 | 第29-34页 |
| 1.5.1 酵母双杂交 | 第29-31页 |
| 1.5.2 免疫共沉淀 | 第31页 |
| 1.5.3 Pull-down | 第31-32页 |
| 1.5.4 双分子荧光互补 | 第32-34页 |
| 2 研究目的与意义 | 第34-35页 |
| 3 材料与方法 | 第35-62页 |
| 3.1 实验材料 | 第35-38页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第35页 |
| 3.1.2 虫株、菌株和细胞 | 第35页 |
| 3.1.3 载体与质粒 | 第35-37页 |
| 3.1.4 引物 | 第37-38页 |
| 3.2 主要仪器与试剂 | 第38-42页 |
| 3.2.1 主要仪器 | 第38-39页 |
| 3.2.2 主要试剂盒 | 第39页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第39-40页 |
| 3.2.4 主要溶液的配制 | 第40-42页 |
| 3.3 实验方法 | 第42-62页 |
| 3.3.1 弓形虫RH株速殖子的培养、收集与纯化 | 第42-43页 |
| 3.3.2 弓形虫RH株基因组DNA的提取 | 第43页 |
| 3.3.3 弓形虫RH株速殖子总RNA的提取 | 第43-44页 |
| 3.3.4 弓形虫RH株速殖子cDNA的制备 | 第44页 |
| 3.3.5 弓形虫微线体蛋白AMA1、MIC2 和MIC3 编码序列的获得 | 第44-45页 |
| 3.3.6 重组载体的构建 | 第45-48页 |
| 3.3.7 酵母双杂交 | 第48-53页 |
| 3.3.8 与微线体蛋白MIC3 互作的宿主蛋白编码序列的获得 | 第53页 |
| 3.3.9 原核表达与表达产物的纯化 | 第53-56页 |
| 3.3.10 GST Pull-down | 第56-57页 |
| 3.3.11 哺乳动物细胞的培养和转染 | 第57-58页 |
| 3.3.12 免疫共沉淀 | 第58-59页 |
| 3.3.13 Western blot | 第59页 |
| 3.3.14 双分子荧光互补 | 第59-60页 |
| 3.3.15 弓形虫速殖子对宿主Wnt/β-catenin信号通路的影响 | 第60页 |
| 3.3.16 微线体蛋白MIC3 对宿主Wnt/β-catenin信号通路的影响 | 第60-62页 |
| 4 结果与分析 | 第62-97页 |
| 4.1 弓形虫微线体蛋白AMA1，MIC2 和MIC3 编码基因的分析和获得 | 第62-64页 |
| 4.1.1 弓形虫微线体蛋白AMA1，MIC2 和MIC3 蛋白初级结构的分析 | 第62-63页 |
| 4.1.2 弓形虫微线体蛋白AMA1，MIC2 和MIC3 编码基因的获得 | 第63-64页 |
| 4.2 酵母双杂交诱饵质粒的构建，表达，自激活和毒性检测 | 第64-70页 |
| 4.2.1 酵母双杂交诱饵质粒的构建 | 第64页 |
| 4.2.2 酵母质粒在酵母中的表达检测 | 第64-65页 |
| 4.2.3 诱饵质粒的自激活和毒性检测 | 第65-66页 |
| 4.2.4 MIC2 不同结构域酵母双杂交诱饵质粒的构建 | 第66-68页 |
| 4.2.5 MIC2 不同结构域诱饵质粒在酵母中的表达检测 | 第68-69页 |
| 4.2.6 MIC2 不同结构域诱饵质粒的自激活和毒力检测 | 第69-70页 |
| 4.3 酵母双杂交筛选与弓形虫微线体蛋白AMA1、MIC2 和MIC3 相互作用的宿主蛋白 | 第70-76页 |
| 4.3.1 宿主互作蛋白的初步筛选 | 第70-71页 |
| 4.3.2 候选阳性克隆插入片段大小的鉴定及质粒拯救 | 第71-73页 |
| 4.3.3 候选阳性互作的回返验证 | 第73页 |
| 4.3.4 阳性插入片段的测序鉴定 | 第73-75页 |
| 4.3.5 阳性互作宿主蛋白的GO分类分析 | 第75-76页 |
| 4.4 MIC3 与筛选宿主蛋白互作的验证 | 第76-90页 |
| 4.4.1 MIC3 筛选宿主蛋白编码基因的获得 | 第76-78页 |
| 4.4.2 MIC3 与筛选宿主蛋白的酵母点对点验证 | 第78-79页 |
| 4.4.3 MIC3 与宿主蛋白Spata3，Dkk2 相互作用的体外Pull-down验证 | 第79-85页 |
| 4.4.4 免疫共沉淀验证MIC3 与宿主蛋白Spata3 和Dkk2 的相互作用 | 第85-88页 |
| 4.4.5 双分子荧光互补验证MIC3 与宿主蛋白Spata3 和Dkk2 的相互作用 | 第88-90页 |
| 4.5 MIC3 与宿主蛋白互作结构域的鉴定 | 第90-92页 |
| 4.6 弓形虫对宿主Wnt/β-catenin信号通路的影响 | 第92-97页 |
| 4.6.1 弓形虫速殖子对宿主Wnt信号转导的影响 | 第92-93页 |
| 4.6.2 微线体蛋白MIC3 对宿主Wnt信号转导的影响 | 第93-95页 |
| 4.6.3 弓形虫速殖子和MIC3 蛋白对宿主Wnt信号调控因子 β-catenin表达量的影响 | 第95-97页 |
| 5 讨论 | 第97-106页 |
| 5.1 与弓形虫微线体蛋白互作宿主蛋白的筛选 | 第97-101页 |
| 5.1.1 鉴定与弓形虫微线体蛋白AMA1、MIC2 和MIC3 互作的宿主蛋白的重要性 | 第97-98页 |
| 5.1.2 酵母双杂交系统的选择、应用 | 第98-99页 |
| 5.1.3 诱饵质粒的自激活和毒性检测 | 第99-100页 |
| 5.1.4 宿主蛋白的初步筛选 | 第100-101页 |
| 5.2 MIC3 阳性互作的验证以及功能分析 | 第101-102页 |
| 5.3 MIC3 互作结构域的鉴定 | 第102-103页 |
| 5.4 弓形虫对宿主Wnt信号通路的影响 | 第103-106页 |
| 6 总结 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-122页 |
| 致谢 | 第122-124页 |
| 附录 1 | 第124-131页 |
| 附录 2 | 第131-132页 |
