| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 前言 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-19页 |
| 1.1 烟草花叶病毒研究现状 | 第12页 |
| 1.2 植物抗病基因研究进展 | 第12-15页 |
| 1.3 CRISPR/Cas9研究进展 | 第15-16页 |
| 1.4 microRNA研究进展 | 第16-18页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第18-19页 |
| 第二章 CV58抗TMV基因的克隆与功能验证 | 第19-35页 |
| 2.1 材料与方法 | 第19-28页 |
| 2.1.1 材料 | 第19页 |
| 2.1.2 烟草CV58抗TMV基因的克隆 | 第19-23页 |
| 2.1.3 CRISPR/Cas9敲除载体的构建 | 第23-27页 |
| 2.1.4 植物过表达载体的构建 | 第27-28页 |
| 2.2 结果与分析 | 第28-33页 |
| 2.2.1 烟草CV58抗TMV的基因的克隆 | 第28-29页 |
| 2.2.2 CRISPR/Cas9敲除载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.2.3 转基因烟草的获得 | 第30-31页 |
| 2.2.4 T_0代转基因植株的检测及抗性检测 | 第31-33页 |
| 2.2.5 转基因烟草抗性分析 | 第33页 |
| 2.3 小结 | 第33-35页 |
| 第三章 TMV胁迫下烟草CV58 microRNA表达谱分析 | 第35-45页 |
| 3.1 材料与方法 | 第35-38页 |
| 3.1.1 材料 | 第35页 |
| 3.1.2 烟草总RNA的提取 | 第35页 |
| 3.1.3 miRNA差异表达谱的筛选流程 | 第35-36页 |
| 3.1.4 miRNA信息分析流程 | 第36-37页 |
| 3.1.5 已知miRNA差异分析 | 第37页 |
| 3.1.6 GO富集分析 | 第37-38页 |
| 3.1.7 KEGG通路分析 | 第38页 |
| 3.2 结果与分析 | 第38-44页 |
| 3.2.1 RNA质量鉴定 | 第38页 |
| 3.2.2 测序质量长度分析 | 第38-40页 |
| 3.2.3 小RNA分类注释分析 | 第40-41页 |
| 3.2.4 microRNA差异表达谱序 | 第41-42页 |
| 3.2.5 GO富集分析 | 第42-43页 |
| 3.2.6 KEGG通路分析 | 第43-44页 |
| 3.3 小结 | 第44-45页 |
| 第四章 烟草CV58在TMV胁迫下microRNA最适内参基因的筛选 | 第45-53页 |
| 4.1 材料与方法 | 第45-48页 |
| 4.1.1 材料 | 第45页 |
| 4.1.2 候选内参基因的选择及引物设计 | 第45-46页 |
| 4.1.3 烟草总RNA的提取和cDNA的合成 | 第46页 |
| 4.1.4 RNA提取质量检测 | 第46-47页 |
| 4.1.5 内参基因的荧光定量PCR分析 | 第47页 |
| 4.1.6 数据分析 | 第47-48页 |
| 4.2 结果与分析 | 第48-52页 |
| 4.2.1 RNA质量检测 | 第48-49页 |
| 4.2.2 内参基因的荧光定量PCR分析 | 第49-50页 |
| 4.2.3 烟草CV58在TMV胁迫下miRNA荧光定量PCR内参基因的筛选 | 第50-52页 |
| 4.3 小结 | 第52-53页 |
| 第五章 结论与讨论 | 第53-55页 |
| 5.1 烟草CV58抗TMV基因的克隆与鉴定 | 第53页 |
| 5.2 TMV胁迫下烟草CV58 microRNA表达谱分析 | 第53-54页 |
| 5.3 烟草CV58在TMV胁迫下microRNA最适内参基因的筛选 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
