| 中文摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1. 前言 | 第11-23页 |
| 1.1 布鲁氏菌病概述 | 第11-12页 |
| 1.2 布鲁氏菌疫苗概述 | 第12-20页 |
| 1.2.1 传统光滑型布鲁氏菌疫苗 | 第12-14页 |
| 1.2.2 粗糙型疫苗的研究 | 第14-16页 |
| 1.2.3 新型布鲁氏菌疫苗 | 第16-20页 |
| 1.3 荧光蛋白-报告基因 | 第20-22页 |
| 1.3.1 荧光蛋白的发现 | 第20页 |
| 1.3.2 荧光蛋白的结构 | 第20-21页 |
| 1.3.3 绿色荧光蛋白家族 | 第21页 |
| 1.3.4 红色系列荧光蛋白 | 第21-22页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第22-23页 |
| 2. 材料与方法 | 第23-45页 |
| 2.1 主要实验耗材与仪器 | 第23-25页 |
| 2.1.1 细胞株与菌株 | 第23页 |
| 2.1.2 培养基 | 第23页 |
| 2.1.3 载体及试剂 | 第23页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第23页 |
| 2.1.5 溶液的配制 | 第23-25页 |
| 2.1.6 实验动物 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-45页 |
| 2.2.1 以绿色荧光蛋白为报告基因构建布鲁氏菌强启动子筛选质粒YGT-pBBR1mcs2 | 第25-28页 |
| 2.2.2 布鲁氏菌强启动子的筛选 | 第28-32页 |
| 2.2.3 以红色荧光蛋白为报告基因构建Pdnak启动子验证质粒 | 第32-33页 |
| 2.2.4 同源重组质粒puc19sacb-VP1的构建 | 第33-35页 |
| 2.2.5 重组布鲁氏菌rS2-VP1的鉴定 | 第35-37页 |
| 2.2.6 重组布鲁氏菌rS2-VP1表达口蹄疫VP1基因转录情况的测定 | 第37-40页 |
| 2.2.7 Western-Blot鉴定重组菌rS2-VP1中VP1蛋白的表达 | 第40-45页 |
| 3. 结果与分析 | 第45-56页 |
| 3.1 以绿色荧光蛋白为报告基因构建布鲁氏菌启动子检测质粒YGT-pBBR1mcs2 | 第45页 |
| 3.2 不同启动子的强弱鉴定 | 第45-49页 |
| 3.2.1 启动子Pdnak的鉴定 | 第45-46页 |
| 3.2.2 启动子Pdnaj的鉴定 | 第46-47页 |
| 3.2.3 启动子Psod的鉴定 | 第47-48页 |
| 3.2.4 质粒YGT-pBBR1mcs2对照 | 第48页 |
| 3.2.5 空白菌S2对照 | 第48-49页 |
| 3.3 以红色荧光蛋白为报告基因对强启动子Pdnak进行验证 | 第49-50页 |
| 3.4 S2-YGT-pBBR1mcs2-Pdnak, S2-pBBR1-RFP-Pdnak的菌落形态 | 第50-51页 |
| 3.5 重组布鲁氏菌rS2-VP1粗糙表型的鉴定 | 第51-52页 |
| 3.6 重组布鲁氏菌rS2-VP1表达口蹄疫VP1蛋白的测定 | 第52-56页 |
| 3.6.1 通过荧光定量PCR方法进行转录水平的鉴定 | 第52页 |
| 3.6.2 Western-blot鉴定布鲁氏菌中VP1的表达 | 第52-56页 |
| 4. 讨论 | 第56-58页 |
| 5. 结论 | 第58-59页 |
| 6. 参考文献 | 第59-65页 |
| 7. 致谢 | 第65-66页 |
| 8. 攻读学位期间论文与专利 | 第66页 |
