| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略词表 | 第9-15页 |
| 前言 | 第15-16页 |
| 第一篇 文献综述 | 第16-33页 |
| 第一章 天然免疫抗病毒蛋白Mx的研究进展 | 第16-26页 |
| 1.1 天然免疫是机体抵抗病原体入侵和扩散的第一道屏障 | 第16页 |
| 1.2 Mx基因的发现 | 第16页 |
| 1.3 Mx蛋白的结构 | 第16-17页 |
| 1.4 Mx的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.5 Mx的抗病毒功能研究 | 第19页 |
| 1.6 Mx抗病毒分子机制 | 第19-23页 |
| 1.6.1 Mx蛋白的GTP酶活性 | 第19-20页 |
| 1.6.2 Mx抑制病毒基因组的初始转录 | 第20页 |
| 1.6.3 Mx与病毒核衣壳相关蛋白结合，水解核衣壳或影响核衣壳入核 | 第20页 |
| 1.6.4 MxA和病毒进化相关的靶特异性决定因素 | 第20-23页 |
| 1.7 Mx的表达与调控研究 | 第23-24页 |
| 1.7.1 Mx的诱导表达 | 第23页 |
| 1.7.2 Mx的表达调控机制 | 第23-24页 |
| 1.8 Mx的应用价值 | 第24-26页 |
| 第二章 口蹄疫病毒的研究进展 | 第26-33页 |
| 2.1 病原学 | 第26页 |
| 2.2 病毒的分子特征 | 第26-27页 |
| 2.3 我国的流行现状 | 第27-29页 |
| 2.3.1 Asia 1 型口蹄疫疫情 | 第27-28页 |
| 2.3.2 A型口蹄疫疫情 | 第28页 |
| 2.3.3 O型口蹄疫疫情 | 第28-29页 |
| 2.4 FMDV的进化变异 | 第29-30页 |
| 2.5 致病机制的研究 | 第30-33页 |
| 2.5.1 病毒感染机制 | 第30-31页 |
| 2.5.2 持续感染致病机制 | 第31页 |
| 2.5.3 逃逸宿主天然免疫机制 | 第31-32页 |
| 2.5.4 诱导细胞凋亡机制 | 第32-33页 |
| 第二篇 研究内容 | 第33-98页 |
| 第一章 牛Mx1定位及其过表达对FMDV复制的影响 | 第33-53页 |
| 1.1 材料和方法 | 第33-45页 |
| 1.1.1 试剂、菌株、载体、细胞与病毒株 | 第33页 |
| 1.1.2 仪器设备 | 第33-34页 |
| 1.1.3 引物设计 | 第34-35页 |
| 1.1.4 牛Mx1基因的克隆 | 第35-38页 |
| 1.1.5 真核表达载体pc DNA3.1-Mx1的构建与鉴定 | 第38-39页 |
| 1.1.6 pcDNA3.1-Mx1的瞬时表达 | 第39-42页 |
| 1.1.7 牛Mx1稳定表达细胞株的建立 | 第42-44页 |
| 1.1.8 牛Mx1的细胞定位 | 第44页 |
| 1.1.9 过表达牛Mx1对FMDV增殖的影响 | 第44-45页 |
| 1.2 结果与分析 | 第45-51页 |
| 1.2.1 牛Mx1基因编码区的PCR扩增 | 第45页 |
| 1.2.2 pEASY-T3-Mx1重组载体的鉴定 | 第45-46页 |
| 1.2.3 重组表达质粒pcDNA3.1-Mx1的鉴定 | 第46-47页 |
| 1.2.4 pcDNA3.1-Mx1转染 293T细胞的瞬时表达 | 第47页 |
| 1.2.5 牛Mx1稳定表达细胞系的建立 | 第47-49页 |
| 1.2.6 牛Mx1的细胞内定位 | 第49-50页 |
| 1.2.7 过表达牛Mx1对FMDV增殖的影响 | 第50-51页 |
| 1.3 讨论 | 第51-52页 |
| 1.3.1 筛选条件的优化 | 第51-52页 |
| 1.3.2 稳定表达细胞系的构建 | 第52页 |
| 1.3.3 牛Mx1具有抗FMDV功能 | 第52页 |
| 1.4 小结 | 第52-53页 |
| 第二章 沉默牛Mx1对口蹄疫病毒复制的影响 | 第53-67页 |
| 2.1 材料和方法 | 第53-60页 |
| 2.1.1 试剂、菌株、载体、细胞与病毒株 | 第53页 |
| 2.1.2 仪器设备 | 第53-54页 |
| 2.1.3 引物设计 | 第54-55页 |
| 2.1.4 RNAi载体的构建 | 第55-57页 |
| 2.1.5 有效沉默牛Mx1的shRNA筛选 | 第57页 |
| 2.1.6 沉默牛Mx1的稳定细胞系获得 | 第57-58页 |
| 2.1.7 沉默牛Mx1对FMDV增殖的影响 | 第58-60页 |
| 2.2 结果与分析 | 第60-65页 |
| 2.2.1 针对牛Mx1的RNAi重组载体的构建 | 第60-61页 |
| 2.2.2 有效沉默牛Mx1的shRNA筛选 | 第61页 |
| 2.2.3 沉默牛Mx1稳定细胞的建立 | 第61-62页 |
| 2.2.4 荧光定量标准曲线及溶解曲线 | 第62-63页 |
| 2.2.5 α-IFN诱导牛Mx1表达的浓度和时间的筛选 | 第63-64页 |
| 2.2.6 沉默牛Mx1对FMDV增殖的影响 | 第64-65页 |
| 2.3 讨论 | 第65-66页 |
| 2.3.1 RNAi载体的选择及shRNA的筛选 | 第65-66页 |
| 2.3.2 牛Mx1沉默细胞系的构建 | 第66页 |
| 2.3.3 沉默牛Mx1促进FMDV的增殖 | 第66页 |
| 2.4 小结 | 第66-67页 |
| 第三章 牛Mx1作用FMDV基因组RNA复制的分子机制 | 第67-77页 |
| 3.1 材料和方法 | 第67-70页 |
| 3.1.1 试剂、菌株、载体、细胞与病毒株 | 第67-68页 |
| 3.1.2 仪器设备 | 第68页 |
| 3.1.3 引物设计 | 第68页 |
| 3.1.4 病毒RNA提取、反转录 | 第68-69页 |
| 3.1.5 阳性标准品的制备 | 第69页 |
| 3.1.6 ssqRT-PCR检测体系的建立和优化 | 第69页 |
| 3.1.7 标准曲线的建立 | 第69-70页 |
| 3.1.8 特异性试验 | 第70页 |
| 3.1.9 敏感性试验 | 第70页 |
| 3.1.10 重复性试验 | 第70页 |
| 3.1.11 牛Mx1对FMDV基因组RNA的作用 | 第70页 |
| 3.2 结果与分析 | 第70-75页 |
| 3.2.1 ssqRT-PCR反应条件的确定及标准曲线的建立 | 第70-72页 |
| 3.2.2 特异性试验 | 第72页 |
| 3.2.3 敏感性试验 | 第72-73页 |
| 3.2.4 重复性试验 | 第73页 |
| 3.2.5 牛Mx1对FMDV基因组RNA的作用 | 第73-75页 |
| 3.3 讨论 | 第75-76页 |
| 3.3.1 FMDV基因组RNA的复制机制 | 第75-76页 |
| 3.3.2 ssqRT-PCR检测方法可用于FMDV基因组RNA的定量分析 | 第76页 |
| 3.3.3 牛Mx1可抑制FMDV基因组RNA的复制 | 第76页 |
| 3.4 小结 | 第76-77页 |
| 第四章 牛Mx1对FMDV蛋白作用的分子机制 | 第77-98页 |
| 4.1 材料和方法 | 第77-86页 |
| 4.1.1 试剂、菌株、载体、细胞 | 第77页 |
| 4.1.2 仪器设备 | 第77-78页 |
| 4.1.3 FMDV病毒蛋白基因的克隆 | 第78-80页 |
| 4.1.5 FMDV病毒蛋白多克隆抗体的制备 | 第80-81页 |
| 4.1.6 牛Mx1对FMDV蛋白的影响 | 第81页 |
| 4.1.7 GST pull-down验证牛Mx1蛋白与 2C蛋白的体外相互作用 | 第81-84页 |
| 4.1.8 免疫共沉淀实验 | 第84-85页 |
| 4.1.9 牛Mx1作用FMDV 2C的结构域定位 | 第85-86页 |
| 4.2 结果与分析 | 第86-95页 |
| 4.2.1 原核表达载体的构建 | 第86-87页 |
| 4.2.2 诱导表达及纯化 | 第87-88页 |
| 4.2.3 多克隆抗体的制备及效价测定 | 第88页 |
| 4.2.4 牛Mx1对FMDV蛋白的作用 | 第88-89页 |
| 4.2.5 牛Mx1蛋白与 2C蛋白的表达 | 第89-91页 |
| 4.2.6 GST pull-down沉淀实验 | 第91-92页 |
| 4.2.7 免疫共沉淀结果 | 第92-93页 |
| 4.2.8 牛Mx1作用FMDV 2C结构域的定位 | 第93-95页 |
| 4.3 讨论 | 第95-96页 |
| 4.3.1 牛Mx1可能作用FMDV蛋白的途径 | 第95页 |
| 4.3.2 牛Mx1可作用于FMDV 2C蛋白 | 第95页 |
| 4.3.3 GST-pull down验证了牛Mx1可与FMDV 2C蛋白结合 | 第95-96页 |
| 4.3.4 免疫共沉淀方法验证了牛Mx1可与FMDV 2C蛋白结合 | 第96页 |
| 4.3.5 验证了牛Mx1与FMDV 2C蛋白作用的结构域 | 第96页 |
| 4.4 小结 | 第96-98页 |
| 结论 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-110页 |
| 作者简介 | 第110-111页 |
| 致谢 | 第111页 |
