| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第12-18页 |
| 1.1 本课题的研究目的与意义 | 第12页 |
| 1.2 桑螟生物防治的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.3 动物孵化酶研究进展 | 第13-15页 |
| 1.4 基于真核生物基因内含子缺失进化分析的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.5 基于动物孵化酶基因内含子缺失进化分析的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.6 本文主要研究内容 | 第17-18页 |
| 第2章 桑螟孵化酶基因(Dpy HE)的克隆与生物信息学分析 | 第18-44页 |
| 2.1 实验材料与方法 | 第18-32页 |
| 2.1.1 实验材料与试剂 | 第18页 |
| 2.1.2 常用试剂盒缓冲液的配制 | 第18-20页 |
| 2.1.3 实验仪器和设备 | 第20页 |
| 2.1.4 生物信息学软件 | 第20-21页 |
| 2.1.5 获取各物种孵化酶样蛋白序列 | 第21-23页 |
| 2.1.6 引物设计 | 第23页 |
| 2.1.7 桑螟总RNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.1.8 Dpy HE第一链c DNA的合成 | 第24页 |
| 2.1.9 PCR克隆Dpy HE部分片段 | 第24-25页 |
| 2.1.10 Dpy HE基因 3’端序列扩增 | 第25-28页 |
| 2.1.11 Dpy HE基因 5’端序列扩增 | 第28-29页 |
| 2.1.12 琼脂糖凝胶电泳 | 第29-30页 |
| 2.1.13 回收DNA目的片段 | 第30页 |
| 2.1.14 目的片段与p MD18-T载体连接 | 第30页 |
| 2.1.15 感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| 2.1.16 转化 | 第31页 |
| 2.1.17 挑取单克隆 | 第31页 |
| 2.1.18 碱裂解法小量抽取质粒DNA | 第31-32页 |
| 2.1.19 重组质粒的酶切鉴定 | 第32页 |
| 2.1.20 甘油菌的制备与测序 | 第32页 |
| 2.2 结果与分析 | 第32-42页 |
| 2.2.1 Dpy HE部分c DNA序列的克隆 | 第32-33页 |
| 2.2.2 Dpy HEc DNA的克隆与序列分析 | 第33-34页 |
| 2.2.3 Dpy HE的系统进化分析 | 第34-39页 |
| 2.2.4 Dpy HE的密码子偏好性分析 | 第39-40页 |
| 2.2.5 Dpy HE蛋白的三维结构分析 | 第40-42页 |
| 2.3 讨论 | 第42-43页 |
| 2.4 本章小结 | 第43-44页 |
| 第3章 桑螟孵化酶基因（Dpy HE）的原核表达 | 第44-55页 |
| 3.1 材料与方法 | 第44-49页 |
| 3.1.1 材料与试剂 | 第44页 |
| 3.1.2 常用试剂和缓冲液的配制 | 第44-45页 |
| 3.1.3 成熟酶对应核苷酸序列、去信号肽对应核苷酸序列与ORF对应核苷酸序列的克隆 | 第45-46页 |
| 3.1.4 原核表达重组载体的构建 | 第46-47页 |
| 3.1.5 Dpy HE蛋白的原核表达 | 第47页 |
| 3.1.6 Bradford法测定蛋白浓度 | 第47页 |
| 3.1.7 SDS-PAGE电泳 | 第47-48页 |
| 3.1.8 Western Blot | 第48-49页 |
| 3.2 实验结果与分析 | 第49-53页 |
| 3.2.1 成熟酶对应核苷酸序列、去信号肽对应核苷酸序列与ORF对应核苷酸序列的克隆 | 第49-50页 |
| 3.2.2 重组表达载体的构建 | 第50页 |
| 3.2.3 重组蛋白的原核表达与Western Blot | 第50-53页 |
| 3.3 讨论 | 第53-54页 |
| 3.4 本章小结 | 第54-55页 |
| 第4章 基于昆虫孵化酶基因及其内含子缺失的进化初步分析 | 第55-62页 |
| 4.1 方法 | 第55-56页 |
| 4.1.1 各物种孵化酶之间同源序列比对及构建系统进化树 | 第55页 |
| 4.1.2 获取孵化酶基因结构及其内含子信息 | 第55页 |
| 4.1.3 Notung软件的使用 | 第55-56页 |
| 4.2 实验结果与分析 | 第56-59页 |
| 4.2.1 可获得基因结构的昆虫孵化酶功能区序列比对及其内含子缺失分析 | 第56-57页 |
| 4.2.2 昆虫孵化酶同源序列保守区对应的内含子信息及其进化分析 | 第57-59页 |
| 4.3 讨论 | 第59-61页 |
| 4.3.1 昆虫孵化酶基因同源序列比对及其基因结构分析 | 第59页 |
| 4.3.2 昆虫孵化酶同源序列保守区对应基因组上内含子信息分析 | 第59-60页 |
| 4.3.3 昆虫孵化酶基因内含子丢失的原因及其可能的途径 | 第60-61页 |
| 4.4 本章小结 | 第61-62页 |
| 结论 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 详细摘要 | 第71-75页 |
