| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略语(Abbreviation) | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-18页 |
| 1.1 鸡毒支原体的概况 | 第11-13页 |
| 1.1.1 鸡毒支原体的研究历史 | 第11页 |
| 1.1.2 鸡毒支原体的病原学和流行病学 | 第11-12页 |
| 1.1.3 临床症状及病理变化 | 第12页 |
| 1.1.4 诊断及治疗 | 第12-13页 |
| 1.1.5 鸡毒支原体的预防 | 第13页 |
| 1.2 鸡毒支原体毒力因子研究 | 第13-15页 |
| 1.2.1 VlhA蛋白 | 第13-14页 |
| 1.2.2 GapA和CrmA | 第14页 |
| 1.2.3 脂蛋白MslA | 第14页 |
| 1.2.4 唾液酸酶 | 第14-15页 |
| 1.3 鸡毒支原体疫苗研究进展 | 第15-16页 |
| 1.3.1 鸡毒支原体灭活油乳剂疫苗 | 第15页 |
| 1.3.2 鸡毒支原体弱毒苗 | 第15-16页 |
| 1.3.3 生物技术疫苗 | 第16页 |
| 1.4 GAPDH蛋白 | 第16-18页 |
| 2 研究目的与意义 | 第18-20页 |
| 3 材料与方法 | 第20-29页 |
| 3.1 试验材料 | 第20-23页 |
| 3.1.1 试验动物 | 第20页 |
| 3.1.2 菌株、质粒 | 第20页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第20页 |
| 3.1.4 主要试剂 | 第20-21页 |
| 3.1.5 主要溶液和培养基 | 第21-23页 |
| 3.2 鸡毒支原体感染试验 | 第23-24页 |
| 3.2.1 鸡毒支原体HS菌株的复苏 | 第23页 |
| 3.2.2 鸡毒支原体HS株CCU的测定 | 第23页 |
| 3.2.3 鸡毒支原体HS菌株的浓缩 | 第23页 |
| 3.2.4 鸡毒支原体感染健康鸡群实验 | 第23页 |
| 3.2.5 鸡血清和呼吸道冲洗液抗体效价的测定 | 第23页 |
| 3.2,6 鸡血清和呼吸道冲洗液血凝抑制价的测定 | 第23-24页 |
| 3.2.7 鸡血清和呼吸道冲洗液的代谢抑制实验 | 第24页 |
| 3.3 目的蛋白的筛选 | 第24-25页 |
| 3.3.1 保护性抗原的筛选 | 第24-25页 |
| 3.3.2 潜在抗原的质谱分析 | 第25页 |
| 3.4 目的抗原的生物信息学分析 | 第25页 |
| 3.5 目的抗原重组蛋白 | 第25-28页 |
| 3.5.1 支原体基因组的提取 | 第25-26页 |
| 3.5.2 目的抗原基因的扩增 | 第26页 |
| 3.5.3 目的基因表达载体构建 | 第26-27页 |
| 3.5.4 色氨酸编码子TGA的定点突变 | 第27页 |
| 3.5.5 重组蛋白的表达 | 第27页 |
| 3.5.6 重组蛋白的纯化 | 第27-28页 |
| 3.5.7 纯化后蛋白的western-blot鉴定 | 第28页 |
| 3.6 rGAPDH多克隆抗体的制备及其MG代谢抑制(MI)作用 | 第28-29页 |
| 3.6.1 抗原的乳化 | 第28页 |
| 3.6.2 BALB/c小鼠的免疫 | 第28-29页 |
| 3.6.3 BALB/c小鼠的抗体检测 | 第29页 |
| 3.6.4 rGAPDH多克隆抗体对鸡毒支原体HS株的MI作用 | 第29页 |
| 4 结果与分析 | 第29-41页 |
| 4.0 鸡毒支原体感染鸡呼吸道冲洗液和血清中IgA和IgY检测 | 第29-30页 |
| 4.1 感染鸡血凝抑制试验和代谢抑制试验结果 | 第30-31页 |
| 4.2 保护性抗原的筛选与质谱分析 | 第31-33页 |
| 4.3 目的抗原生物信息学分析 | 第33-37页 |
| 4.3.1 GAPDH抗原表位预测 | 第33-34页 |
| 4.3.2 VlhA4.12抗原表位预测 | 第34-36页 |
| 4.3.3 三级结构相似性及其空间构像分析 | 第36-37页 |
| 4.4 GAPDH基因和VlhA4.12胞外区基因的克隆与表达 | 第37-40页 |
| 4.4.1 目的基因的克隆 | 第37-39页 |
| 4.4.2 重组蛋白的表达 | 第39-40页 |
| 4.5 GAPDH重组蛋白多抗血清的代谢抑制实验 | 第40-41页 |
| 5 讨论 | 第41-43页 |
| 6 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 致谢 | 第49页 |
