| 主要创新点 | 第4-5页 |
| 中文摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 第一章 综述 | 第20-32页 |
| 1.1 金属铜的生物学特性 | 第20-22页 |
| 1.1.1 铜被生物体利用的历程 | 第20页 |
| 1.1.2 铜离子的配位化学 | 第20-21页 |
| 1.1.3 铜在蛋白和酶中的功能 | 第21-22页 |
| 1.2 细胞内铜离子平衡机制 | 第22-24页 |
| 1.3 革兰氏阴性菌的铜调控体系及CopC蛋白 | 第24-26页 |
| 1.3.1 革兰氏阴性菌的铜调控体系 | 第24-25页 |
| 1.3.2 铜分子伴侣CopC | 第25-26页 |
| 1.3.3 同源性比较 | 第26页 |
| 1.4 蛋白质结构与功能的关系 | 第26-27页 |
| 1.5 蛋白质的中间态 | 第27-30页 |
| 1.5.1 中间态在蛋白质折叠中的作用 | 第27-29页 |
| 1.5.2 表面活性剂变性的基本原理 | 第29-30页 |
| 1.6 本课题的研究意义 | 第30-32页 |
| 第二章 CopC突变体的构建、表达和纯化 | 第32-48页 |
| 2.1 引言 | 第32页 |
| 2.2 材料 | 第32-38页 |
| 2.2.1 质粒与菌种 | 第32页 |
| 2.2.2 寡核苷酸 | 第32-34页 |
| 2.2.3 主要酶及生化试剂 | 第34页 |
| 2.2.4 主要仪器设备 | 第34-35页 |
| 2.2.5 主要试剂配制 | 第35-38页 |
| 2.3 方法 | 第38-44页 |
| 2.3.1 质粒的提取和鉴定 | 第38-39页 |
| 2.3.2 CopC突变体重组质粒的构建 | 第39-43页 |
| 2.3.3 CopC及其突变体的表达 | 第43页 |
| 2.3.4 蛋白质的纯化 | 第43-44页 |
| 2.4 结果 | 第44-47页 |
| 2.4.1 pET-20b-CopC质粒的提取与鉴定 | 第44页 |
| 2.4.2 突变体质粒的酶切鉴定结果 | 第44-45页 |
| 2.4.3 突变体的诱导表达及纯化 | 第45-47页 |
| 2.5 小结 | 第47-48页 |
| 第三章 结构基元模型及分子动力学模拟 | 第48-62页 |
| 3.1 引言 | 第48页 |
| 3.2 蛋白质解折叠自由能计算方法 | 第48-49页 |
| 3.2.1 Tanford’s模型 | 第48页 |
| 3.2.2 变性剂分子结合模型 | 第48-49页 |
| 3.2.3 线性外推法 | 第49页 |
| 3.3 结构基元模型 | 第49-55页 |
| 3.3.1 基本假定 | 第50-54页 |
| 3.3.2 结构基元模型的应用示例 | 第54-55页 |
| 3.4 受控分子动力学模拟(SMD) | 第55-61页 |
| 3.4.1 分子动力学 | 第55-56页 |
| 3.4.2 NAMD的模型构建 | 第56-57页 |
| 3.4.3 RMSD值的分析 | 第57-59页 |
| 3.4.4 恒速牵拉 | 第59-61页 |
| 3.5 小结 | 第61-62页 |
| 第四章 CopC的结构稳定性及Tyr79和Trp83所发挥的作用 | 第62-76页 |
| 4.1 引言 | 第62-63页 |
| 4.2 材料 | 第63页 |
| 4.2.1 主要试剂 | 第63页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第63页 |
| 4.3 方法 | 第63-65页 |
| 4.3.1 蛋白储备液制备 | 第63-64页 |
| 4.3.2 圆二色谱的测定 | 第64页 |
| 4.3.3 荧光寿命的测定 | 第64页 |
| 4.3.4 铜结合力的测定 | 第64页 |
| 4.3.5 丙烯酰胺及碘化钾淬灭实验 | 第64页 |
| 4.3.6 化学变性 | 第64页 |
| 4.3.7 数据处理 | 第64-65页 |
| 4.4 结果 | 第65-72页 |
| 4.4.1 突变对蛋白质构型的影响 | 第65页 |
| 4.4.2 荧光发射光谱 | 第65-66页 |
| 4.4.3 突变对蛋白质结合铜的能力的影响 | 第66-67页 |
| 4.4.4 CopC及其突变体的荧光寿命 | 第67-69页 |
| 4.4.5 丙烯酰胺与碘化钾淬灭 | 第69-70页 |
| 4.4.6 盐酸胍/尿素引起的apoCopC及其突变体的解折叠 | 第70-72页 |
| 4.5 讨论 | 第72-75页 |
| 4.6 小结 | 第75-76页 |
| 第五章 表面活性剂SDS/CTAB稳定的CopC的中间态 | 第76-102页 |
| 5.1 引言 | 第76-77页 |
| 5.2 材料 | 第77页 |
| 5.2.1 主要试剂 | 第77页 |
| 5.2.2 主要仪器 | 第77页 |
| 5.3 方法 | 第77-79页 |
| 5.3.1 蛋白储备液制备 | 第77页 |
| 5.3.2 圆二色谱的测定 | 第77-78页 |
| 5.3.3 荧光寿命及荧光各向异性的测定 | 第78页 |
| 5.3.4 不同解折叠程度蛋白的铜淬灭实验 | 第78-79页 |
| 5.3.5 TNS与蛋白质的相互作用 | 第79页 |
| 5.3.6 化学变性 | 第79页 |
| 5.3.7 数据处理 | 第79页 |
| 5.3.8 能量最小化 | 第79页 |
| 5.4 结果 | 第79-98页 |
| 5.4.1 荧光研究 | 第79-81页 |
| 5.4.2 远紫外CD光谱 | 第81页 |
| 5.4.3 CopC的荧光寿命 | 第81-83页 |
| 5.4.4 SDS与蛋白质的相互作用 | 第83-84页 |
| 5.4.5 金属离子对中间态(I”)的荧光发射光谱的影响 | 第84-85页 |
| 5.4.6 CTAB与蛋白质的相互作用 | 第85-87页 |
| 5.4.7 蛋白质的中间态与尿素或者盐酸胍的相互作用 | 第87-91页 |
| 5.4.8 N端结构的坍塌 | 第91-92页 |
| 5.4.9 时间分辨的各向异性测量 | 第92-94页 |
| 5.4.10 TNS的稳态荧光光谱 | 第94-95页 |
| 5.4.11 分子动力学数据分析 | 第95-97页 |
| 5.4.12 SDS及CTAB胶束浓度的测定 | 第97-98页 |
| 5.5 讨论 | 第98-99页 |
| 5.6 结论 | 第99-102页 |
| 第六章 HSSC与apoCopC的光谱相互作用 | 第102-114页 |
| 6.1 引言 | 第102页 |
| 6.2 材料 | 第102-103页 |
| 6.2.1 主要试剂 | 第102页 |
| 6.2.2 主要仪器 | 第102-103页 |
| 6.3 方法 | 第103页 |
| 6.3.1 蛋白浓度测定 | 第103页 |
| 6.3.2 溶液配制 | 第103页 |
| 6.3.3 蛋白质光谱测定 | 第103页 |
| 6.3.4 荧光寿命的测定 | 第103页 |
| 6.3.5 分子模拟 | 第103页 |
| 6.4 结果与讨论 | 第103-112页 |
| 6.4.1 荧光光谱 | 第103-104页 |
| 6.4.2 apoCopC对CTAB溶液中HSSC的荧光的影响 | 第104-105页 |
| 6.4.3 蛋白和HSSC结合Cu~(2+)能力的比较 | 第105-108页 |
| 6.4.4 荧光寿命的测定 | 第108-109页 |
| 6.4.5 apoCopC-HSSC的淬灭常数与结合位点数 | 第109-110页 |
| 6.4.6 apoCopC-HSSC的结合模型 | 第110-111页 |
| 6.4.7 HSSC与apoCopC的能量转移 | 第111-112页 |
| 6.4.8 分子模拟 | 第112页 |
| 6.5 结论 | 第112-114页 |
| 第七章 CopC中铜调控机理的初步探究 | 第114-124页 |
| 7.1 引言 | 第114页 |
| 7.2 材料 | 第114-115页 |
| 7.2.1 主要试剂 | 第114页 |
| 7.2.2 主要仪器 | 第114-115页 |
| 7.3 方法 | 第115页 |
| 7.3.1 溶液制备 | 第115页 |
| 7.3.2 蛋白浓度测定 | 第115页 |
| 7.3.3 蛋白质光谱测定 | 第115页 |
| 7.4 结果与讨论 | 第115-122页 |
| 7.4.1 突变体A85M的荧光特性 | 第115-116页 |
| 7.4.2 Cu_N-CopC与Ag~+的结合性质 | 第116-118页 |
| 7.4.3 突变体A85M与Hg~(2+)的结合性质 | 第118-120页 |
| 7.4.4 Hg_c~(2+)-A85M的形成常数 | 第120-121页 |
| 7.4.5 突变对CopC氧还开关的影响 | 第121-122页 |
| 7.5 小结 | 第122-124页 |
| 总结与展望 | 第124-128页 |
| 工作总结 | 第124-126页 |
| 工作展望 | 第126-128页 |
| 参考文献 | 第128-146页 |
| 缩略语表 | 第146-147页 |
| 个人简况及联系方式 | 第147-148页 |
| 已发表及待发表论文 | 第148-149页 |
| 致谢 | 第149-151页 |
