| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第10-21页 |
| 1.1 研究背景 | 第10-20页 |
| 1.1.1 水稻淀粉改良研究进展 | 第10-12页 |
| 1.1.2 淀粉合成的关键基因研究 | 第12-16页 |
| 1.1.3 基因工程技术在改良稻米品质中的应用 | 第16-20页 |
| 1.2 立题依据及意义 | 第20页 |
| 1.3 研究内容 | 第20-21页 |
| 1.3.1 MIGS技术在调控水稻GBSSI基因表达中的应用 | 第20页 |
| 1.3.2 基因叠加技术在水稻淀粉合成中的应用 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-37页 |
| 2.1 材料 | 第21-25页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第21页 |
| 2.1.2 工程菌株 | 第21页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第21页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.5 主要缓冲液和培养基配方 | 第22-25页 |
| 2.2 方法 | 第25-37页 |
| 2.2.1 MIGS-OsGBSSI载体构建 | 第25-28页 |
| 2.2.2 大肠杆菌感受态制备及转化 | 第28-29页 |
| 2.2.3 基因叠加表达载体构建 | 第29-30页 |
| 2.2.4 农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第30-31页 |
| 2.2.5 水稻转基因再生植株鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2.6 水稻目标基因表达分析 | 第32-33页 |
| 2.2.7 碘染色法、扫描电镜观察淀粉颗粒 | 第33页 |
| 2.2.8 总淀粉、可溶性糖含量测定 | 第33-34页 |
| 2.2.9 直链淀粉含量测定 | 第34-36页 |
| 2.2.10 千粒重测定法 | 第36-37页 |
| 第三章 结果与分析 | 第37-56页 |
| 3.1 MIGS-OsGBSSI载体构建及转化 | 第37-38页 |
| 3.1.1 OsGBSSI基因片段扩增 | 第37页 |
| 3.1.2 MIGS-OsGBSSI载体构建 | 第37-38页 |
| 3.1.3 MIGS-OsGBSSI转基因植株阳性检测 | 第38页 |
| 3.2 T_1水稻胚乳目标基因表达检测及表型分析 | 第38-41页 |
| 3.3 T_1代水稻胚乳直链淀粉含量测定 | 第41-43页 |
| 3.3.1 蒽酮硫酸法测定总淀粉含量 | 第41页 |
| 3.3.2 双波长法测定直链淀粉含量 | 第41-43页 |
| 3.4 T_1代水抬胚乳扫描电镜观察 | 第43-44页 |
| 3.5 基因叠加载体构建 | 第44-47页 |
| 3.5.1 水稻胚乳特异性表达启动子GluA2扩增 | 第44页 |
| 3.5.2 淀粉合成关键酶基因OsAGPL2、OsAGPS2b扩增 | 第44-45页 |
| 3.5.3 OsAGPL2、OsAGPS2b单基因及叠加基因载体构建及验证 | 第45-47页 |
| 3.6 水稻基因叠加载体转基因植株阳性检测 | 第47-49页 |
| 3.6.1 T_0转基因植株阳性检测 | 第47-48页 |
| 3.6.2 T_1转基因植株阳性检测 | 第48-49页 |
| 3.7 水稻基因叠加的转基因植株目标基因表达检测 | 第49-52页 |
| 3.7.1 OsAGPL2、OsAGPS2b基因特异性过量表达检测 | 第49-50页 |
| 3.7.2 OsAGPL2、OsAGPS2b基因半定量表达检测 | 第50-52页 |
| 3.8 T_2代水稻胚乳总淀粉、可溶性糖含量测定 | 第52-55页 |
| 3.9 T_2代水稻种子千粒重测定 | 第55-56页 |
| 第四章 讨论 | 第56-59页 |
| 4.1 MIGS技术在水稻淀粉合成途径中的应用 | 第56-57页 |
| 4.2 基因叠加技术在水稻淀粉合成途径中的应用 | 第57-59页 |
| 第五章 总结与展望 | 第59-61页 |
| 5.1 总结 | 第59页 |
| 5.2 创新点 | 第59页 |
| 5.3 展望 | 第59-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 附录 | 第69-73页 |
| 硕士期间取得的研究成果 | 第73页 |
