| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1.1 基因编辑技术 | 第12-13页 |
| 1.2 CRISPR/Cas9技术 | 第13-17页 |
| 1.2.1 CRISPR/Cas系统简介 | 第13-14页 |
| 1.2.2 CRISPR/Cas9技术工作原理 | 第14-15页 |
| 1.2.3 CRISPR/Cas9技术的广泛应用 | 第15-16页 |
| 1.2.4 Cas9的优化研究 | 第16页 |
| 1.2.5 核酸酶活性报告系统 | 第16-17页 |
| 1.3 DSB的修复机制 | 第17-18页 |
| 1.4 Csy4介导的多sgRNA表达 | 第18页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第18-20页 |
| 第二章 CRISPR/Cas9系统中Cas9蛋白DNA结合域研究 | 第20-34页 |
| 2.1 实验原理 | 第20-21页 |
| 2.2 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.2.1 主要载体，实验细胞及感受态菌株 | 第21页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.2.3 配制试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.4 主要仪器 | 第23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-28页 |
| 2.3.1 sgRNA/Cas9-FokI系列载体构建 | 第23-25页 |
| 2.3.2 SSA-DsRed/eGFP双荧光报告载体构建 | 第25-26页 |
| 2.3.3 Cas9蛋白DNA结合域分析 | 第26-27页 |
| 2.3.4 sgRNA/Cas9-FokI系统PAM依赖性检测 | 第27-28页 |
| 2.4 结果分析 | 第28-32页 |
| 2.4.1 相关载体的构建结果 | 第28-29页 |
| 2.4.2 Cas9蛋白DNA结合域分析 | 第29-31页 |
| 2.4.3 sgRNA/Cas9-FokI系统PAM依赖性检测 | 第31-32页 |
| 2.5 讨论 | 第32-33页 |
| 2.6 小结 | 第33-34页 |
| 第三章 Cys4介导的sgRNA-shRNA阵列表达技术研究 | 第34-44页 |
| 3.1 实验原理 | 第34-35页 |
| 3.2 实验材料 | 第35-36页 |
| 3.2.1 主要试剂 | 第35-36页 |
| 3.2.2 配制试剂与主要器材 | 第36页 |
| 3.3 实验方法 | 第36-40页 |
| 3.3.1 相关载体构建 | 第36-37页 |
| 3.3.2 相关sgRNA活性验证 | 第37-38页 |
| 3.3.3 LIG4.shRNA活性检测 | 第38-40页 |
| 3.4 结果分析 | 第40-42页 |
| 3.4.1 相关载体的构建结果 | 第40-41页 |
| 3.4.2 相关sgRNA活性的验证结果 | 第41页 |
| 3.4.3 LIG4.shRNA活性的检测结果 | 第41-42页 |
| 3.5 讨论 | 第42-43页 |
| 3.6 小结 | 第43-44页 |
| 第四章 结论及主要创新点 | 第44-45页 |
| 4.1 主要结论 | 第44页 |
| 4.2 主要创新点 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 附录 | 第50-51页 |
| 缩略词 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 作者简介 | 第53页 |
