| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第10-20页 |
| 1.1 小花棘豆研究概况 | 第10-12页 |
| 1.1.1 小花棘豆分类学特征及生境 | 第10页 |
| 1.1.2 小花棘豆的危害及防治 | 第10-11页 |
| 1.1.3 小花棘豆的综合利用价值 | 第11-12页 |
| 1.2 疯草Embellisia内生真菌研究进展 | 第12-13页 |
| 1.3 苦马豆素研究概况 | 第13-15页 |
| 1.3.1 苦马豆素的来源 | 第13-14页 |
| 1.3.1.1 植物中提取 | 第13页 |
| 1.3.1.2 真菌中提取 | 第13-14页 |
| 1.3.1.3 人工合成 | 第14页 |
| 1.3.2 苦马豆素理化性质 | 第14页 |
| 1.3.3 苦马豆素毒性机理及抗肿瘤活性研究进展 | 第14-15页 |
| 1.4 酵母氨酸还原酶基因研究背景 | 第15-17页 |
| 1.5 丝状真菌基因敲除技术研究进展 | 第17-18页 |
| 1.6 丝状真菌原生质体制备与再生研究概况 | 第18-19页 |
| 1.7 本研究的目的及意义 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 真菌材料 | 第20页 |
| 2.1.2 酵母氨酸还原酶基因敲除载体 | 第20页 |
| 2.1.3 试剂及培养基 | 第20-23页 |
| 2.1.3.1 试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.3.2 培养基及主要试剂的配制 | 第21-23页 |
| 2.1.4 引物序列 | 第23页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-30页 |
| 2.2.1 酵母氨酸还原酶基因敲除载体DNA提取与验证 | 第23-25页 |
| 2.2.1.1 重组质粒的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.1.2 酶切验证 | 第24页 |
| 2.2.1.3 hph基因表达 | 第24-25页 |
| 2.2.2 小花棘豆Embellisia内生真菌的培养 | 第25页 |
| 2.2.3 野生型Embellisia内生真菌对潮霉素耐受性的检测 | 第25页 |
| 2.2.4 打靶目的DNA片段的扩增 | 第25页 |
| 2.2.5 小花棘豆Embellisia内生真菌原生质体的制备再生与转化 | 第25-27页 |
| 2.2.5.1 原生质体制备 | 第25-26页 |
| 2.2.5.2 原生质体再生 | 第26页 |
| 2.2.5.3 原生质体转化 | 第26-27页 |
| 2.2.6 酵母氨酸还原酶基因缺失突变株的筛选和鉴定 | 第27-30页 |
| 2.2.6.1 潮霉素抗性初筛 | 第27页 |
| 2.2.6.2 缺失突变株的PCR鉴定 | 第27-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-41页 |
| 3.1 酵母氨酸还原酶基因敲除载体验证 | 第30-31页 |
| 3.1.1 重组质粒的提取 | 第30页 |
| 3.1.2 酶切验证 | 第30-31页 |
| 3.1.3 hph基因表达 | 第31页 |
| 3.2 小花棘豆Embellisia内生真菌的培养 | 第31-32页 |
| 3.3 野生型Embellisia内生真菌对潮霉素耐受性的检测 | 第32-33页 |
| 3.4 打靶目的DNA片段的扩增 | 第33-34页 |
| 3.5 小花棘豆Embellisia内生真菌原生质体的制备 | 第34-37页 |
| 3.5.1 酶浓度对原生质体制备的影响 | 第34页 |
| 3.5.2 酶解反应温度对原生质体制备的影响 | 第34-35页 |
| 3.5.3 酶解反应时间对原生质体制备的影响 | 第35页 |
| 3.5.4 渗透压稳定剂对原生质体制备的影响 | 第35-36页 |
| 3.5.5 菌龄对原生质体制备的影响 | 第36-37页 |
| 3.6 小花棘豆Embellisia内生真菌的原生质体再生 | 第37页 |
| 3.7 筛选鉴定酵母氨酸还原酶基因缺失突变株 | 第37-41页 |
| 3.7.1 缺失突变株的潮霉素抗性初筛 | 第37-38页 |
| 3.7.2 缺失突变株的PCR鉴定 | 第38-41页 |
| 3.7.2.1 基因组DNA提取 | 第38-39页 |
| 3.7.2.2 SetA PCR鉴定 | 第39页 |
| 3.7.2.3 SetB PCR鉴定 | 第39-41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 4.1 酵母氨酸还原酶基因敲除载体可用性验证 | 第41-42页 |
| 4.2 小花棘豆Embellisia内生真菌原生质体的制备与转化 | 第42页 |
| 4.3 酵母氨酸还原酶基因缺失突变株的筛选鉴定 | 第42-43页 |
| 5 主要结论 | 第43页 |
| 6 前景展望 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-50页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51页 |
