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小花棘豆Embellisia内生真菌酵母氨酸还原酶基因缺失突变株的构建及筛选鉴定

摘要第3-5页
abstract第5-6页
1 引言第10-20页
    1.1 小花棘豆研究概况第10-12页
        1.1.1 小花棘豆分类学特征及生境第10页
        1.1.2 小花棘豆的危害及防治第10-11页
        1.1.3 小花棘豆的综合利用价值第11-12页
    1.2 疯草Embellisia内生真菌研究进展第12-13页
    1.3 苦马豆素研究概况第13-15页
        1.3.1 苦马豆素的来源第13-14页
            1.3.1.1 植物中提取第13页
            1.3.1.2 真菌中提取第13-14页
            1.3.1.3 人工合成第14页
        1.3.2 苦马豆素理化性质第14页
        1.3.3 苦马豆素毒性机理及抗肿瘤活性研究进展第14-15页
    1.4 酵母氨酸还原酶基因研究背景第15-17页
    1.5 丝状真菌基因敲除技术研究进展第17-18页
    1.6 丝状真菌原生质体制备与再生研究概况第18-19页
    1.7 本研究的目的及意义第19-20页
2 材料与方法第20-30页
    2.1 实验材料第20-23页
        2.1.1 真菌材料第20页
        2.1.2 酵母氨酸还原酶基因敲除载体第20页
        2.1.3 试剂及培养基第20-23页
            2.1.3.1 试剂第20-21页
            2.1.3.2 培养基及主要试剂的配制第21-23页
        2.1.4 引物序列第23页
        2.1.5 主要仪器设备第23页
    2.2 实验方法第23-30页
        2.2.1 酵母氨酸还原酶基因敲除载体DNA提取与验证第23-25页
            2.2.1.1 重组质粒的提取第23-24页
            2.2.1.2 酶切验证第24页
            2.2.1.3 hph基因表达第24-25页
        2.2.2 小花棘豆Embellisia内生真菌的培养第25页
        2.2.3 野生型Embellisia内生真菌对潮霉素耐受性的检测第25页
        2.2.4 打靶目的DNA片段的扩增第25页
        2.2.5 小花棘豆Embellisia内生真菌原生质体的制备再生与转化第25-27页
            2.2.5.1 原生质体制备第25-26页
            2.2.5.2 原生质体再生第26页
            2.2.5.3 原生质体转化第26-27页
        2.2.6 酵母氨酸还原酶基因缺失突变株的筛选和鉴定第27-30页
            2.2.6.1 潮霉素抗性初筛第27页
            2.2.6.2 缺失突变株的PCR鉴定第27-30页
3 结果与分析第30-41页
    3.1 酵母氨酸还原酶基因敲除载体验证第30-31页
        3.1.1 重组质粒的提取第30页
        3.1.2 酶切验证第30-31页
        3.1.3 hph基因表达第31页
    3.2 小花棘豆Embellisia内生真菌的培养第31-32页
    3.3 野生型Embellisia内生真菌对潮霉素耐受性的检测第32-33页
    3.4 打靶目的DNA片段的扩增第33-34页
    3.5 小花棘豆Embellisia内生真菌原生质体的制备第34-37页
        3.5.1 酶浓度对原生质体制备的影响第34页
        3.5.2 酶解反应温度对原生质体制备的影响第34-35页
        3.5.3 酶解反应时间对原生质体制备的影响第35页
        3.5.4 渗透压稳定剂对原生质体制备的影响第35-36页
        3.5.5 菌龄对原生质体制备的影响第36-37页
    3.6 小花棘豆Embellisia内生真菌的原生质体再生第37页
    3.7 筛选鉴定酵母氨酸还原酶基因缺失突变株第37-41页
        3.7.1 缺失突变株的潮霉素抗性初筛第37-38页
        3.7.2 缺失突变株的PCR鉴定第38-41页
            3.7.2.1 基因组DNA提取第38-39页
            3.7.2.2 SetA PCR鉴定第39页
            3.7.2.3 SetB PCR鉴定第39-41页
4 讨论第41-43页
    4.1 酵母氨酸还原酶基因敲除载体可用性验证第41-42页
    4.2 小花棘豆Embellisia内生真菌原生质体的制备与转化第42页
    4.3 酵母氨酸还原酶基因缺失突变株的筛选鉴定第42-43页
5 主要结论第43页
6 前景展望第43-44页
参考文献第44-50页
硕士期间发表的论文第50-51页
致谢第51页

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