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膀胱癌CYR61基因异常表达的临床生物学意义及其分子机制

英文缩略词第10-11页
摘要第11-13页
ABSTRACT第13-14页
第一章 导论(含义獻练述)第15-25页
    1. 膀胱癌概述第15-18页
    2. 膀胱癌相关的基因组改变第18-19页
    3. 膀胱癌相关的基因表达谱改变第19-21页
    4. 膀胱癌相关的miRNA表达谱改变第21-22页
    5. 膀胱癌相关的蛋白质组改变第22-23页
    6. 问题与展望第23页
    7. 本课题的研究策略与目的第23-25页
第二章 非浸润性与肌层浸润性膀胱癌的差异表达基因及其生物学和临床意义(结果与讨论)第25-60页
    一、实验结果第25-54页
        第一节 膀胱癌患者肿瘤组织中差异表达基因谱的筛选与验证第25-42页
            1. 非浸润性和浸润性膀胱癌mRNA表达谱中的差异表达基因筛选第25-34页
                1.1 “起始样本”病例的基本特征第25-27页
                1.2 基于p值的差异表达基因筛选第27-30页
                1.3 基于p值与Fold Change的差异表达基因筛选第30-34页
            2. 非浸润性膀胱和浸润性膀胱癌差异表达基因的验证第34-42页
                2.1 “起始样本”中差异表达基因的实时定量PCR验证第34-36页
                2.2 膀胱癌独立样本中8个差异表达基因的实时定量PCR验证第36-40页
                2.3 CYR61在肌层浸润性膀胱癌高表达第40-42页
        第二节 CYR61蛋白在非肌层浸润性与肌层浸润性膀胱癌中差异表达及其临床意义第42-54页
            1. 膀胱癌组织中CYR61的蛋白表达情况及其临床意义第42-47页
                1.1 “IHC样本”病例的基本特征第42页
                1.2 非肌层浸润性和肌层浸润性膀胱癌组织中CYR61蛋白表达差异第42-45页
                1.3 肿瘤组织CYR61蛋白表达与膀胱癌患者无瘤生存情况的关系第45-47页
            2. 膀胱癌患者术前尿中CYR61蛋白含量及其临床意义第47-54页
                2.1 “术前尿样本”病例的基本特征第47-48页
                2.2 膀胱癌患者术前尿中CYR61蛋白的含量及其临床意义第48-50页
                2.3 术前尿中CYR61与其他蛋白鉴别诊断肌层浸润性膀胱癌的比较第50-53页
                2.4 术前尿上清中CYR61与影像学方法鉴别诊断肌层浸润性膀胱癌的比较第53-54页
    二、讨论第54-59页
        1. 临床相关研究的质量控制第54页
        2. 候选验证差异表达基因的筛选标准第54-55页
        3. 候选验证差异表达基因验证技术平台差异比较第55-56页
        4. 膀胱癌组织中的CYR61蛋白表达第56-57页
        5. 膀胱癌患者术前尿上清中蛋白的ELISA检测第57-59页
    三、本章小结第59-60页
第三章 CYR61在膀胱癌浸润过程中的作用及其机制探索(结果与讨论)第60-83页
    一、实验结果第60-75页
        第一节 CYR61基因对膀胱癌细胞侵袭迁移能力的影响及其机制第60-71页
            1. CYR61基因真核表达质粒的构建第60-61页
            2. CYR61基因在人膀胱上皮来源细胞系中的内源性表达第61-63页
            3. CYR61基因外源性过表达对浸润性膀胱癌细胞侵袭和迁移能力的影响第63-65页
            4. CYR61基因外源性过表达对非浸润性膀胱癌细胞侵袭和迁移能力的影响第65-67页
            5. CYR61基因表达沉默对浸润性膀胱癌细胞侵袭和迁移能力的影响第67-69页
            6. CYR61基因调节细胞侵袭能力的机制探索第69-71页
        第二节 浸润性膀胱癌中CYR61表达上调的机制探索第71-75页
            1. CYR61基因在浸润性膀胱癌和非浸润性膀胱癌中的基因拷贝数差异第71-72页
            2. 膀胱癌中miRNA对CYR61的转录后调控第72-75页
                2.1 CYR61基因3'-UTR荧光素酶表达质粒构建第72-73页
                2.2 CYR61基因3'-UTR重组质粒转染细胞及双荧光素酶活性测定第73-74页
                2.3 膀胱癌组织中miR-30e与CYR61表达的相关性第74-75页
    二、讨论第75-82页
        1. CCN家族与CYR61第75-77页
        2. CYR61选择性剪切体第77-79页
        3. CYR61在膀胱及膀胱癌中的生物学功能第79-81页
        4. CYR61转录调控第81-82页
    三、本章小结第82-83页
第四章 材料与方法第83-117页
    一、实验材料第83-92页
        1. 膀胱癌患者及其生物学样品第83-84页
            1.1 新鲜冻存膀胱癌组织第83页
            1.2 福尔马林固定石蜡包埋膀胱癌组织第83-84页
            1.3 膀胱癌患者术前尿样本第84页
        2. 细胞系第84页
        3. 菌株及质粒载体第84-86页
        4. 临床样品收集、制备和鉴定所需试剂第86页
        5. 实时定量PCR材料与试剂第86页
        6. Realtime-PCR用引物序列第86-87页
        7. 分子克隆所用试剂第87页
        8. 分子克隆用引物第87页
        9. 抗体第87-88页
        10. ELISA检测及其他试剂盒第88页
        11. 细胞培养和转染第88-89页
        12. 蛋白质分离、纯化、定量和Western blot分析第89页
        13. 常用试剂的配制第89-91页
        14. 主要仪器第91-92页
    二. 实验方法第92-117页
        1. 样品总RNA制备第92页
        2. RNA样品的质量鉴定第92-93页
        3. RNA逆转录为cDNA第93-94页
        4. RT-PCR反应第94页
        5. 实时荧光定量PCR第94-97页
        6. 免疫组织化学染色第97页
        7. 尿上清蛋白的ELISA检测第97-100页
        8. 分子生物实验方法第100-103页
        9. 蛋白的提取和Western blot分析第103-104页
        10. 细胞生物学实验方法第104-106页
        11. 细胞体外浸润分析第106页
        12. 划痕实验第106页
        13. 双荧光素酶报告实验第106-107页
        14. 统计学分析第107-117页
参考文献第117-127页
致谢第127-129页
基金资助第129-130页
个人简历第130-132页

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