英文缩略词 | 第10-11页 |
摘要 | 第11-13页 |
ABSTRACT | 第13-14页 |
第一章 导论(含义獻练述) | 第15-25页 |
1. 膀胱癌概述 | 第15-18页 |
2. 膀胱癌相关的基因组改变 | 第18-19页 |
3. 膀胱癌相关的基因表达谱改变 | 第19-21页 |
4. 膀胱癌相关的miRNA表达谱改变 | 第21-22页 |
5. 膀胱癌相关的蛋白质组改变 | 第22-23页 |
6. 问题与展望 | 第23页 |
7. 本课题的研究策略与目的 | 第23-25页 |
第二章 非浸润性与肌层浸润性膀胱癌的差异表达基因及其生物学和临床意义(结果与讨论) | 第25-60页 |
一、实验结果 | 第25-54页 |
第一节 膀胱癌患者肿瘤组织中差异表达基因谱的筛选与验证 | 第25-42页 |
1. 非浸润性和浸润性膀胱癌mRNA表达谱中的差异表达基因筛选 | 第25-34页 |
1.1 “起始样本”病例的基本特征 | 第25-27页 |
1.2 基于p值的差异表达基因筛选 | 第27-30页 |
1.3 基于p值与Fold Change的差异表达基因筛选 | 第30-34页 |
2. 非浸润性膀胱和浸润性膀胱癌差异表达基因的验证 | 第34-42页 |
2.1 “起始样本”中差异表达基因的实时定量PCR验证 | 第34-36页 |
2.2 膀胱癌独立样本中8个差异表达基因的实时定量PCR验证 | 第36-40页 |
2.3 CYR61在肌层浸润性膀胱癌高表达 | 第40-42页 |
第二节 CYR61蛋白在非肌层浸润性与肌层浸润性膀胱癌中差异表达及其临床意义 | 第42-54页 |
1. 膀胱癌组织中CYR61的蛋白表达情况及其临床意义 | 第42-47页 |
1.1 “IHC样本”病例的基本特征 | 第42页 |
1.2 非肌层浸润性和肌层浸润性膀胱癌组织中CYR61蛋白表达差异 | 第42-45页 |
1.3 肿瘤组织CYR61蛋白表达与膀胱癌患者无瘤生存情况的关系 | 第45-47页 |
2. 膀胱癌患者术前尿中CYR61蛋白含量及其临床意义 | 第47-54页 |
2.1 “术前尿样本”病例的基本特征 | 第47-48页 |
2.2 膀胱癌患者术前尿中CYR61蛋白的含量及其临床意义 | 第48-50页 |
2.3 术前尿中CYR61与其他蛋白鉴别诊断肌层浸润性膀胱癌的比较 | 第50-53页 |
2.4 术前尿上清中CYR61与影像学方法鉴别诊断肌层浸润性膀胱癌的比较 | 第53-54页 |
二、讨论 | 第54-59页 |
1. 临床相关研究的质量控制 | 第54页 |
2. 候选验证差异表达基因的筛选标准 | 第54-55页 |
3. 候选验证差异表达基因验证技术平台差异比较 | 第55-56页 |
4. 膀胱癌组织中的CYR61蛋白表达 | 第56-57页 |
5. 膀胱癌患者术前尿上清中蛋白的ELISA检测 | 第57-59页 |
三、本章小结 | 第59-60页 |
第三章 CYR61在膀胱癌浸润过程中的作用及其机制探索(结果与讨论) | 第60-83页 |
一、实验结果 | 第60-75页 |
第一节 CYR61基因对膀胱癌细胞侵袭迁移能力的影响及其机制 | 第60-71页 |
1. CYR61基因真核表达质粒的构建 | 第60-61页 |
2. CYR61基因在人膀胱上皮来源细胞系中的内源性表达 | 第61-63页 |
3. CYR61基因外源性过表达对浸润性膀胱癌细胞侵袭和迁移能力的影响 | 第63-65页 |
4. CYR61基因外源性过表达对非浸润性膀胱癌细胞侵袭和迁移能力的影响 | 第65-67页 |
5. CYR61基因表达沉默对浸润性膀胱癌细胞侵袭和迁移能力的影响 | 第67-69页 |
6. CYR61基因调节细胞侵袭能力的机制探索 | 第69-71页 |
第二节 浸润性膀胱癌中CYR61表达上调的机制探索 | 第71-75页 |
1. CYR61基因在浸润性膀胱癌和非浸润性膀胱癌中的基因拷贝数差异 | 第71-72页 |
2. 膀胱癌中miRNA对CYR61的转录后调控 | 第72-75页 |
2.1 CYR61基因3'-UTR荧光素酶表达质粒构建 | 第72-73页 |
2.2 CYR61基因3'-UTR重组质粒转染细胞及双荧光素酶活性测定 | 第73-74页 |
2.3 膀胱癌组织中miR-30e与CYR61表达的相关性 | 第74-75页 |
二、讨论 | 第75-82页 |
1. CCN家族与CYR61 | 第75-77页 |
2. CYR61选择性剪切体 | 第77-79页 |
3. CYR61在膀胱及膀胱癌中的生物学功能 | 第79-81页 |
4. CYR61转录调控 | 第81-82页 |
三、本章小结 | 第82-83页 |
第四章 材料与方法 | 第83-117页 |
一、实验材料 | 第83-92页 |
1. 膀胱癌患者及其生物学样品 | 第83-84页 |
1.1 新鲜冻存膀胱癌组织 | 第83页 |
1.2 福尔马林固定石蜡包埋膀胱癌组织 | 第83-84页 |
1.3 膀胱癌患者术前尿样本 | 第84页 |
2. 细胞系 | 第84页 |
3. 菌株及质粒载体 | 第84-86页 |
4. 临床样品收集、制备和鉴定所需试剂 | 第86页 |
5. 实时定量PCR材料与试剂 | 第86页 |
6. Realtime-PCR用引物序列 | 第86-87页 |
7. 分子克隆所用试剂 | 第87页 |
8. 分子克隆用引物 | 第87页 |
9. 抗体 | 第87-88页 |
10. ELISA检测及其他试剂盒 | 第88页 |
11. 细胞培养和转染 | 第88-89页 |
12. 蛋白质分离、纯化、定量和Western blot分析 | 第89页 |
13. 常用试剂的配制 | 第89-91页 |
14. 主要仪器 | 第91-92页 |
二. 实验方法 | 第92-117页 |
1. 样品总RNA制备 | 第92页 |
2. RNA样品的质量鉴定 | 第92-93页 |
3. RNA逆转录为cDNA | 第93-94页 |
4. RT-PCR反应 | 第94页 |
5. 实时荧光定量PCR | 第94-97页 |
6. 免疫组织化学染色 | 第97页 |
7. 尿上清蛋白的ELISA检测 | 第97-100页 |
8. 分子生物实验方法 | 第100-103页 |
9. 蛋白的提取和Western blot分析 | 第103-104页 |
10. 细胞生物学实验方法 | 第104-106页 |
11. 细胞体外浸润分析 | 第106页 |
12. 划痕实验 | 第106页 |
13. 双荧光素酶报告实验 | 第106-107页 |
14. 统计学分析 | 第107-117页 |
参考文献 | 第117-127页 |
致谢 | 第127-129页 |
基金资助 | 第129-130页 |
个人简历 | 第130-132页 |