摘要 | 第7-9页 |
Abstract | 第9-10页 |
第1章 文献综述 | 第11-21页 |
1.1 研究背景 | 第11-12页 |
1.2 青蒿 | 第12-13页 |
1.3 青蒿素 | 第13-16页 |
1.3.1 青蒿素的物理性质及衍生物 | 第13页 |
1.3.2 腺毛体是青蒿素合成、分泌和储存部位 | 第13-14页 |
1.3.3 青蒿素的生物合成途径 | 第14-16页 |
1.4 影响青蒿素含量因素 | 第16-17页 |
1.4.1 气候环境和海拔高度对青蒿素积累的影响 | 第16页 |
1.4.2 品种、形态差异以及生长时期和采集部位对青蒿素积累的影响 | 第16-17页 |
1.4.3 MeJA对青蒿素积累的影响 | 第17页 |
1.5 MeJA对植物作用机理与受体蛋白COI1 | 第17-21页 |
1.5.1 MeJA生物合成途径 | 第18页 |
1.5.2 MeJA的作用 | 第18-19页 |
1.5.3 MeJA的信号传导途径 | 第19-20页 |
1.5.4 JA信号通路的受体蛋白COI1 | 第20-21页 |
第2章 绪论 | 第21-25页 |
2.1 研究目的和意义 | 第21-22页 |
2.2 研究内容和范围 | 第22-23页 |
2.3 研究的技术路线 | 第23-25页 |
第3章 材料与方法 | 第25-47页 |
3.1 实验材料及试剂耗材 | 第25-27页 |
3.1.1 植物材料 | 第25页 |
3.1.2 菌株和质粒 | 第25页 |
3.1.3 仪器和设备 | 第25-26页 |
3.1.4 常用试剂、试剂盒和酶 | 第26页 |
3.1.5 自配试剂 | 第26-27页 |
3.2 常规方法与步骤 | 第27-33页 |
3.2.1 RNA提取 | 第27-28页 |
3.2.2 RNA反转录为cDNA | 第28-29页 |
3.2.3 CTAB法提DNA | 第29-30页 |
3.2.4 目的条带胶回收以及与克隆载体T连接 | 第30-31页 |
3.2.5 大肠杆菌感受态制备与转化(CaCl_2法) | 第31-32页 |
3.2.6 农杆菌感受态细胞的制备与植物表达载体转化农杆菌感受态细胞 | 第32-33页 |
3.2.7 质粒提取 | 第33页 |
3.2.8 重组子的鉴定、测序 | 第33页 |
3.3 基因克隆及生物信息学分析 | 第33-37页 |
3.3.1 青蒿cDNA第一链的合成 | 第33页 |
3.3.2 青蒿AaCOI1基因的克隆 | 第33-34页 |
3.3.3 青蒿AaJAZ5基因的克隆 | 第34-37页 |
3.3.4 生物信息学分析 | 第37页 |
3.4 AaCOI1和AaJAZ5的组织表达及诱导分析 | 第37-39页 |
3.4.1 荧光定量cDNA合成 | 第37-38页 |
3.4.2 荧光定量引物筛选、标准曲线的制作及扩增效率的检测 | 第38-39页 |
3.4.3 AaCOI1和AaJAZ5诱导表达分析 | 第39页 |
3.5 亚细胞定位 | 第39-41页 |
3.5.1 AaCOI1亚细胞定位载体构建 | 第39-41页 |
3.5.2 p1300-AaCOI1-GFP瞬时转化于烟草叶片 | 第41页 |
3.6 双分子荧光互补 | 第41-43页 |
3.6.1 荧光互补植物表达载体构建 | 第41-42页 |
3.6.2 荧光互补植物表达载体转入农杆菌 | 第42-43页 |
3.6.3 植物工程菌瞬时转化于烟草叶片 | 第43页 |
3.7 AaCOI1在拟南芥coi1-1突变体植株中功能互补实验 | 第43-47页 |
3.7.1 pHB–AaCOI1植物表达载体构建 | 第43-44页 |
3.7.2 拟南芥蘸花法转化重组质粒pHB–AaCOI1 | 第44-45页 |
3.7.3 功能互补分析 | 第45-46页 |
3.7.4 功能互补转基因拟南芥在MeJA处理后的根长和花青素的提取测定 | 第46-47页 |
第4章 结果与讨论 | 第47-67页 |
4.1 青蒿AaCOI1基因克隆与分析 | 第47-51页 |
4.1.1 AaCOI1基因的获得 | 第47页 |
4.1.2 AaCOI1生物信息学分析 | 第47-51页 |
4.2 青蒿 AaJAZ5基因克隆与分析 | 第51-55页 |
4.2.1 AaJAZ5基因的获得 | 第51-52页 |
4.2.2 AaJAZ5生物信息学分析 | 第52-55页 |
4.3 AaCOI1和AaJAZ5的组织表达分析 | 第55-56页 |
4.5 AaCOI1和AaJAZ5的诱导表达分析 | 第56-57页 |
4.6 AaCOI1的亚细胞定位 | 第57页 |
4.7 AaCOI1与AaJAZ的相互作用 | 第57-58页 |
4.8 AaCOI1基因的功能验证 | 第58-60页 |
4.9 AaCOI1转基因拟南芥在MeJA处理后根长和花青素的测定 | 第60-63页 |
4.10 MeJA处理后AaCOI1转基因拟南芥后花青素合成途径相关基因表达量变化 | 第63-67页 |
第5章 结论与展望 | 第67-69页 |
5.1 结论与分析 | 第67-68页 |
5.2 展望 | 第68-69页 |
参考文献 | 第69-75页 |
附录 | 第75-79页 |
附录1:常用抗生素以及细菌培养基的配置 | 第75-76页 |
附录2:MS培养基配方 | 第76-77页 |
附录3:缩略词表 | 第77-79页 |
攻读硕士学位期间发表的论文 | 第79-81页 |
致谢 | 第81页 |