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青蒿茉莉酸受体AaCOI1的功能研究

摘要第7-9页
Abstract第9-10页
第1章 文献综述第11-21页
    1.1 研究背景第11-12页
    1.2 青蒿第12-13页
    1.3 青蒿素第13-16页
        1.3.1 青蒿素的物理性质及衍生物第13页
        1.3.2 腺毛体是青蒿素合成、分泌和储存部位第13-14页
        1.3.3 青蒿素的生物合成途径第14-16页
    1.4 影响青蒿素含量因素第16-17页
        1.4.1 气候环境和海拔高度对青蒿素积累的影响第16页
        1.4.2 品种、形态差异以及生长时期和采集部位对青蒿素积累的影响第16-17页
        1.4.3 MeJA对青蒿素积累的影响第17页
    1.5 MeJA对植物作用机理与受体蛋白COI1第17-21页
        1.5.1 MeJA生物合成途径第18页
        1.5.2 MeJA的作用第18-19页
        1.5.3 MeJA的信号传导途径第19-20页
        1.5.4 JA信号通路的受体蛋白COI1第20-21页
第2章 绪论第21-25页
    2.1 研究目的和意义第21-22页
    2.2 研究内容和范围第22-23页
    2.3 研究的技术路线第23-25页
第3章 材料与方法第25-47页
    3.1 实验材料及试剂耗材第25-27页
        3.1.1 植物材料第25页
        3.1.2 菌株和质粒第25页
        3.1.3 仪器和设备第25-26页
        3.1.4 常用试剂、试剂盒和酶第26页
        3.1.5 自配试剂第26-27页
    3.2 常规方法与步骤第27-33页
        3.2.1 RNA提取第27-28页
        3.2.2 RNA反转录为cDNA第28-29页
        3.2.3 CTAB法提DNA第29-30页
        3.2.4 目的条带胶回收以及与克隆载体T连接第30-31页
        3.2.5 大肠杆菌感受态制备与转化(CaCl_2法)第31-32页
        3.2.6 农杆菌感受态细胞的制备与植物表达载体转化农杆菌感受态细胞第32-33页
        3.2.7 质粒提取第33页
        3.2.8 重组子的鉴定、测序第33页
    3.3 基因克隆及生物信息学分析第33-37页
        3.3.1 青蒿cDNA第一链的合成第33页
        3.3.2 青蒿AaCOI1基因的克隆第33-34页
        3.3.3 青蒿AaJAZ5基因的克隆第34-37页
        3.3.4 生物信息学分析第37页
    3.4 AaCOI1和AaJAZ5的组织表达及诱导分析第37-39页
        3.4.1 荧光定量cDNA合成第37-38页
        3.4.2 荧光定量引物筛选、标准曲线的制作及扩增效率的检测第38-39页
        3.4.3 AaCOI1和AaJAZ5诱导表达分析第39页
    3.5 亚细胞定位第39-41页
        3.5.1 AaCOI1亚细胞定位载体构建第39-41页
        3.5.2 p1300-AaCOI1-GFP瞬时转化于烟草叶片第41页
    3.6 双分子荧光互补第41-43页
        3.6.1 荧光互补植物表达载体构建第41-42页
        3.6.2 荧光互补植物表达载体转入农杆菌第42-43页
        3.6.3 植物工程菌瞬时转化于烟草叶片第43页
    3.7 AaCOI1在拟南芥coi1-1突变体植株中功能互补实验第43-47页
        3.7.1 pHB–AaCOI1植物表达载体构建第43-44页
        3.7.2 拟南芥蘸花法转化重组质粒pHB–AaCOI1第44-45页
        3.7.3 功能互补分析第45-46页
        3.7.4 功能互补转基因拟南芥在MeJA处理后的根长和花青素的提取测定第46-47页
第4章 结果与讨论第47-67页
    4.1 青蒿AaCOI1基因克隆与分析第47-51页
        4.1.1 AaCOI1基因的获得第47页
        4.1.2 AaCOI1生物信息学分析第47-51页
    4.2 青蒿 AaJAZ5基因克隆与分析第51-55页
        4.2.1 AaJAZ5基因的获得第51-52页
        4.2.2 AaJAZ5生物信息学分析第52-55页
    4.3 AaCOI1和AaJAZ5的组织表达分析第55-56页
    4.5 AaCOI1和AaJAZ5的诱导表达分析第56-57页
    4.6 AaCOI1的亚细胞定位第57页
    4.7 AaCOI1与AaJAZ的相互作用第57-58页
    4.8 AaCOI1基因的功能验证第58-60页
    4.9 AaCOI1转基因拟南芥在MeJA处理后根长和花青素的测定第60-63页
    4.10 MeJA处理后AaCOI1转基因拟南芥后花青素合成途径相关基因表达量变化第63-67页
第5章 结论与展望第67-69页
    5.1 结论与分析第67-68页
    5.2 展望第68-69页
参考文献第69-75页
附录第75-79页
    附录1:常用抗生素以及细菌培养基的配置第75-76页
    附录2:MS培养基配方第76-77页
    附录3:缩略词表第77-79页
攻读硕士学位期间发表的论文第79-81页
致谢第81页

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