| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 缩略语 | 第6-10页 |
| 前言 | 第10页 |
| 第一篇 文献综述 | 第10-19页 |
| 1.1 牛结核病病原及基因组研究 | 第10-11页 |
| 1.2 牛结核病流行病学情况 | 第11-12页 |
| 1.2.1 发达国家的流行情况 | 第11页 |
| 1.2.2 发展中国家的流行情况 | 第11页 |
| 1.2.3 我国的流行情况 | 第11-12页 |
| 1.3 牛结核病的诊断方法 | 第12-15页 |
| 1.3.1 细菌学检测方法 | 第12页 |
| 1.3.2 免疫学检测方法 | 第12-13页 |
| 1.3.3 分子生物学方法 | 第13-15页 |
| 1.4 牛分枝杆菌主要保护性抗原 | 第15-18页 |
| 1.4.1 ESAT6家族蛋白 | 第15-16页 |
| 1.4.2 热休克蛋白（Hsps） | 第16页 |
| 1.4.3 MPB系列蛋白 | 第16-17页 |
| 1.4.4 Ag85复合物 | 第17页 |
| 1.4.5 PE/PPE家族 | 第17-18页 |
| 1.4.6 其他蛋白 | 第18页 |
| 1.5 研究目的及意义 | 第18-19页 |
| 第二篇 研究内容 | 第19-53页 |
| 第一章 牛分枝杆菌ESAT6、CFP10、MPB83和FixB基因的克隆及重组质粒的构建 | 第19-30页 |
| 引言 | 第19页 |
| 1.1 材料 | 第19-22页 |
| 1.1.1 菌种及质粒 | 第19-20页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第20-21页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第21页 |
| 1.1.4 主要试剂的配置 | 第21-22页 |
| 1.2 方法 | 第22-26页 |
| 1.2.1 FixB和MPB83基因的克隆 | 第22-23页 |
| 1.2.2 重组pET-28a-MPB83和pET-28a-FixB原核表达载体的构建及鉴定 | 第23-26页 |
| 1.2.3 MPB83和FixB基因序列测定与生物信息学分析 | 第26页 |
| 1.3 结果与分析 | 第26-29页 |
| 1.3.1 FixB和MPB83目的基因的克隆 | 第26页 |
| 1.3.2 重组表达载体的鉴定 | 第26-27页 |
| 1.3.3 测序分析 | 第27-29页 |
| 1.4 讨论 | 第29页 |
| 1.5 小结 | 第29-30页 |
| 第二章 ESAT6、CFP10、MPB83和FixB蛋白的诱导表达 | 第30-36页 |
| 引言 | 第30页 |
| 2.1 材料 | 第30-31页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第30页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第30-31页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第31页 |
| 2.1.4 主要试剂配置 | 第31页 |
| 2.2 方法 | 第31-33页 |
| 2.2.1 ESAT6、CFP10、MPB83和FixB蛋白的诱导表达 | 第31-32页 |
| 2.2.2 ESAT6、CFP10、MPB83和FixB蛋白的SDS-PAGE电泳 | 第32-33页 |
| 2.3 结果与分析 | 第33-34页 |
| 2.3.1 四个蛋白的诱导表达及表达产物的SDS-PAGE分析 | 第33-34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-35页 |
| 2.5 小结 | 第35-36页 |
| 第三章 ESAT6、CFP10、MPB83和FixB蛋白的鉴定与纯化 | 第36-44页 |
| 引言 | 第36页 |
| 3.1 材料 | 第36-37页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第36页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第36页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第36-37页 |
| 3.1.4 主要试剂配制 | 第37页 |
| 3.2 方法 | 第37-39页 |
| 3.2.1 Western blot鉴定 | 第37-38页 |
| 3.2.2 ESAT6、CFP10、MPB83和FixB蛋白的纯化 | 第38-39页 |
| 3.2.3 BCA法测定蛋白浓度 | 第39页 |
| 3.3 结果与分析 | 第39-42页 |
| 3.3.1 Western blot鉴定结果 | 第39-40页 |
| 3.3.2 四个重组蛋白纯化结果 | 第40-41页 |
| 3.3.3 纯化蛋白浓度的测定结果 | 第41-42页 |
| 3.4 讨论 | 第42-43页 |
| 3.5 小结 | 第43-44页 |
| 第四章 牛分枝杆菌新型“鸡尾酒”抗原用于ELISA检测方法的初步应用 | 第44-53页 |
| 引言 | 第44页 |
| 4.1 材料 | 第44-45页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第44页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第44页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第44-45页 |
| 4.1.4 主要试剂 | 第45页 |
| 4.2 方法 | 第45-47页 |
| 4.2.1 PPD-ELISA操作步骤 | 第45页 |
| 4.2.2 重组蛋白ELISA条件的确定 | 第45-47页 |
| 4.3 结果与分析 | 第47-50页 |
| 4.3.1 FixB-ELISA抗原包被浓度和血清稀释度的确定 | 第47页 |
| 4.3.2 酶标抗体工作浓度的确定 | 第47-48页 |
| 4.3.3 ESAT6、CFP10、MPB83抗原包被浓度和血清稀释度的确定 | 第48页 |
| 4.3.4 临界值的确定 | 第48页 |
| 4.3.5 特异性实验 | 第48-49页 |
| 4.3.6 敏感性实验 | 第49页 |
| 4.3.7 “鸡尾酒”抗原ELISA检测方法的敏感性与特异性比较 | 第49-50页 |
| 4.4 讨论 | 第50-51页 |
| 4.5 小结 | 第51-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-62页 |
| 作者简介 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
