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恶性肿瘤功能基因分析方法的应用研究

摘要第2-4页
Abstract第4-5页
第一章 绪论第10-31页
    1.1 功能基因UHRF1第10-15页
        1.1.1 泛素样含PHD和环指域1(UHRF1)第10-13页
            1.1.1.1 UHRF1的分子结构第10-11页
            1.1.1.2 LMRF1的调节机制分析第11-12页
            1.1.1.3 肿瘤UHRF1基因检测第12-13页
            1.1.1.4 UHRF1与肿瘤的靶向药物第13页
        1.1.2 人类细胞周期蛋白CYCLIN Y(CCNY)第13-15页
            1.1.2.1 CCNY的结构第14页
            1.1.2.2 CCNY的功能与分子机制第14-15页
            1.1.2.3 CCNY与肿瘤第15页
    1.2 功能基因分析技术第15-25页
        1.2.1 基因干扰技术第15-17页
        1.2.2 实时荧光定量PCR分析第17页
        1.2.3 蛋白印迹技术第17-19页
        1.2.4 流式细胞技术第19-20页
        1.2.5 CCK-8比色法第20-21页
        1.2.6 HOECHST33342染色法第21页
        1.2.7 TRANSWELL小室试验第21-22页
        1.2.8 免疫组织化学染色法第22-23页
        1.2.9 SDS-PAGE电泳技术第23-24页
        1.2.10 MTT比色法第24-25页
        1.2.11 克隆形成试验第25页
    1.3 研究内容和创新点第25-26页
    参考文献第26-31页
第二章 人卵巢癌组织中UHRF1基因检测与分析第31-46页
    2.1 引言第31页
    2.2 实验部分第31-40页
        2.2.1 标本准备第31-32页
        2.2.2 试剂第32-33页
        2.2.3 试剂配制第33页
        2.2.4 主要仪器第33-34页
        2.2.5 实验方法第34-40页
            2.2.5.1 卵巢癌组织总RNA的提取第34-35页
            2.2.5.2 cDNA合成第35-36页
            2.2.5.3 卵巢癌组织UHRF1检测第36-37页
            2.2.5.4 卵巢癌组织核蛋白的抽提第37-38页
            2.2.5.5 SDS-PAGE电泳第38页
            2.2.5.6 转膜第38-39页
            2.2.5.7 免疫反应第39页
            2.2.5.8 免疫组织化学染色第39-40页
        2.2.6 数据分析第40页
    2.3 结果第40-43页
        2.3.1 组织中UHRF1 MRNA的相对表达量第40-41页
        2.3.2 组织中UHRF1蛋白表达水平第41页
        2.3.3 组织中UHRF1蛋白的表达阳性率第41-42页
        2.3.4 UHRF1蛋白与临床病理参数分析第42-43页
    2.4 讨论第43-44页
    参考文献第44-46页
第三章 卵巢癌细胞株UHRF1基因功能分析方法的应用研究第46-72页
    3.1 引言第46-47页
    3.2 实验部分第47-59页
        3.2.1 实验样本第47页
        3.2.2 主要试剂第47-48页
            3.2.2.1 细胞培养及转染试剂第47页
            3.2.2.2 细胞增殖和凋亡检测试剂第47页
            3.2.2.3 细胞周期检测试剂第47页
            3.2.2.4 细胞侵袭试验试剂第47页
            3.2.2.5 抗体第47-48页
        3.2.3 主要仪器第48-49页
        3.2.4 实验方法第49-59页
            3.2.4.1 细胞培养第49-50页
            3.2.4.2 RNAI技术抑制UHRF1基因第50-52页
            3.2.4.3 RT-PCR验证转染效果第52-56页
            3.2.4.4 WESTERN-BLOT实验第56页
            3.2.4.5 CCK-8检测细胞增殖水平第56-57页
            3.2.4.6 细胞的凋亡水平检测第57页
            3.2.4.7 HOECHST 33342染色第57页
            3.2.4.8 流式细胞技术检测第57-58页
            3.2.4.9 TRANSWELL小室实验第58页
            3.2.4.10 WERSTERN BLOT抽提细胞周期蛋白第58-59页
            3.2.4.11 数据分析与处理第59页
    3.3 结果第59-69页
        3.3.1 转染前后的RT-PCR结果第59-61页
        3.3.2 转染前后WESTERN BLOT结果第61-63页
        3.3.3 UHRF1敲除前后细胞凋亡变化第63-66页
        3.3.4 CCK-8实验结果第66页
        3.3.5 TRANSWELL小室实验结果第66-68页
        3.3.6 流式细胞术检测细胞周期变化第68-69页
        3.3.7 WESTERN BLOT检测细胞周期蛋白的变化第69页
    3.4 讨论第69-70页
    参考文献第70-72页
第四章 乳腺癌细胞株细胞周期蛋白CYCLIN Y检测分析第72-86页
    4.1 引言第72页
    4.2 实验部分第72-78页
        4.2.1 试剂第72-73页
        4.2.2 主要仪器第73-74页
        4.2.3 标本准备第74页
        4.2.4 实验方法第74-78页
            4.2.4.1 免疫组化染色第74页
            4.2.4.2 细胞培养第74-75页
            4.2.4.3 慢病毒载体构建第75页
            4.2.4.4 实时荧光定量PCR第75-77页
            4.2.4.5 MTT实验第77页
            4.2.4.6 克隆形成实验第77页
            4.2.4.7 流式细胞术检测第77页
            4.2.4.8 胞内信号分析第77页
            4.2.4.9 数据分析第77-78页
    4.3 实验结果第78-83页
        4.3.1 乳腺组织中细胞周期蛋白CCNY的表达量第78页
        4.3.2 CCNY慢病毒转染效率第78-80页
        4.3.3 CCNY下调抑制MDA-MB-231和MCF-7细胞增殖第80-81页
        4.3.4 CCNY下调促使MDA-MB-231和MCF-7细胞分裂停滞于G0/G1期第81-82页
        4.3.5 细胞内信号通路分析第82-83页
    4.4 讨论第83-84页
    参考文献第84-86页
附录1 本论文主要中英文缩略词对照表第86-88页
附录2 博士研究生期间发表的论文第88-89页
致谢第89-90页

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