摘要 | 第2-4页 |
Abstract | 第4-5页 |
第一章 绪论 | 第10-31页 |
1.1 功能基因UHRF1 | 第10-15页 |
1.1.1 泛素样含PHD和环指域1(UHRF1) | 第10-13页 |
1.1.1.1 UHRF1的分子结构 | 第10-11页 |
1.1.1.2 LMRF1的调节机制分析 | 第11-12页 |
1.1.1.3 肿瘤UHRF1基因检测 | 第12-13页 |
1.1.1.4 UHRF1与肿瘤的靶向药物 | 第13页 |
1.1.2 人类细胞周期蛋白CYCLIN Y(CCNY) | 第13-15页 |
1.1.2.1 CCNY的结构 | 第14页 |
1.1.2.2 CCNY的功能与分子机制 | 第14-15页 |
1.1.2.3 CCNY与肿瘤 | 第15页 |
1.2 功能基因分析技术 | 第15-25页 |
1.2.1 基因干扰技术 | 第15-17页 |
1.2.2 实时荧光定量PCR分析 | 第17页 |
1.2.3 蛋白印迹技术 | 第17-19页 |
1.2.4 流式细胞技术 | 第19-20页 |
1.2.5 CCK-8比色法 | 第20-21页 |
1.2.6 HOECHST33342染色法 | 第21页 |
1.2.7 TRANSWELL小室试验 | 第21-22页 |
1.2.8 免疫组织化学染色法 | 第22-23页 |
1.2.9 SDS-PAGE电泳技术 | 第23-24页 |
1.2.10 MTT比色法 | 第24-25页 |
1.2.11 克隆形成试验 | 第25页 |
1.3 研究内容和创新点 | 第25-26页 |
参考文献 | 第26-31页 |
第二章 人卵巢癌组织中UHRF1基因检测与分析 | 第31-46页 |
2.1 引言 | 第31页 |
2.2 实验部分 | 第31-40页 |
2.2.1 标本准备 | 第31-32页 |
2.2.2 试剂 | 第32-33页 |
2.2.3 试剂配制 | 第33页 |
2.2.4 主要仪器 | 第33-34页 |
2.2.5 实验方法 | 第34-40页 |
2.2.5.1 卵巢癌组织总RNA的提取 | 第34-35页 |
2.2.5.2 cDNA合成 | 第35-36页 |
2.2.5.3 卵巢癌组织UHRF1检测 | 第36-37页 |
2.2.5.4 卵巢癌组织核蛋白的抽提 | 第37-38页 |
2.2.5.5 SDS-PAGE电泳 | 第38页 |
2.2.5.6 转膜 | 第38-39页 |
2.2.5.7 免疫反应 | 第39页 |
2.2.5.8 免疫组织化学染色 | 第39-40页 |
2.2.6 数据分析 | 第40页 |
2.3 结果 | 第40-43页 |
2.3.1 组织中UHRF1 MRNA的相对表达量 | 第40-41页 |
2.3.2 组织中UHRF1蛋白表达水平 | 第41页 |
2.3.3 组织中UHRF1蛋白的表达阳性率 | 第41-42页 |
2.3.4 UHRF1蛋白与临床病理参数分析 | 第42-43页 |
2.4 讨论 | 第43-44页 |
参考文献 | 第44-46页 |
第三章 卵巢癌细胞株UHRF1基因功能分析方法的应用研究 | 第46-72页 |
3.1 引言 | 第46-47页 |
3.2 实验部分 | 第47-59页 |
3.2.1 实验样本 | 第47页 |
3.2.2 主要试剂 | 第47-48页 |
3.2.2.1 细胞培养及转染试剂 | 第47页 |
3.2.2.2 细胞增殖和凋亡检测试剂 | 第47页 |
3.2.2.3 细胞周期检测试剂 | 第47页 |
3.2.2.4 细胞侵袭试验试剂 | 第47页 |
3.2.2.5 抗体 | 第47-48页 |
3.2.3 主要仪器 | 第48-49页 |
3.2.4 实验方法 | 第49-59页 |
3.2.4.1 细胞培养 | 第49-50页 |
3.2.4.2 RNAI技术抑制UHRF1基因 | 第50-52页 |
3.2.4.3 RT-PCR验证转染效果 | 第52-56页 |
3.2.4.4 WESTERN-BLOT实验 | 第56页 |
3.2.4.5 CCK-8检测细胞增殖水平 | 第56-57页 |
3.2.4.6 细胞的凋亡水平检测 | 第57页 |
3.2.4.7 HOECHST 33342染色 | 第57页 |
3.2.4.8 流式细胞技术检测 | 第57-58页 |
3.2.4.9 TRANSWELL小室实验 | 第58页 |
3.2.4.10 WERSTERN BLOT抽提细胞周期蛋白 | 第58-59页 |
3.2.4.11 数据分析与处理 | 第59页 |
3.3 结果 | 第59-69页 |
3.3.1 转染前后的RT-PCR结果 | 第59-61页 |
3.3.2 转染前后WESTERN BLOT结果 | 第61-63页 |
3.3.3 UHRF1敲除前后细胞凋亡变化 | 第63-66页 |
3.3.4 CCK-8实验结果 | 第66页 |
3.3.5 TRANSWELL小室实验结果 | 第66-68页 |
3.3.6 流式细胞术检测细胞周期变化 | 第68-69页 |
3.3.7 WESTERN BLOT检测细胞周期蛋白的变化 | 第69页 |
3.4 讨论 | 第69-70页 |
参考文献 | 第70-72页 |
第四章 乳腺癌细胞株细胞周期蛋白CYCLIN Y检测分析 | 第72-86页 |
4.1 引言 | 第72页 |
4.2 实验部分 | 第72-78页 |
4.2.1 试剂 | 第72-73页 |
4.2.2 主要仪器 | 第73-74页 |
4.2.3 标本准备 | 第74页 |
4.2.4 实验方法 | 第74-78页 |
4.2.4.1 免疫组化染色 | 第74页 |
4.2.4.2 细胞培养 | 第74-75页 |
4.2.4.3 慢病毒载体构建 | 第75页 |
4.2.4.4 实时荧光定量PCR | 第75-77页 |
4.2.4.5 MTT实验 | 第77页 |
4.2.4.6 克隆形成实验 | 第77页 |
4.2.4.7 流式细胞术检测 | 第77页 |
4.2.4.8 胞内信号分析 | 第77页 |
4.2.4.9 数据分析 | 第77-78页 |
4.3 实验结果 | 第78-83页 |
4.3.1 乳腺组织中细胞周期蛋白CCNY的表达量 | 第78页 |
4.3.2 CCNY慢病毒转染效率 | 第78-80页 |
4.3.3 CCNY下调抑制MDA-MB-231和MCF-7细胞增殖 | 第80-81页 |
4.3.4 CCNY下调促使MDA-MB-231和MCF-7细胞分裂停滞于G0/G1期 | 第81-82页 |
4.3.5 细胞内信号通路分析 | 第82-83页 |
4.4 讨论 | 第83-84页 |
参考文献 | 第84-86页 |
附录1 本论文主要中英文缩略词对照表 | 第86-88页 |
附录2 博士研究生期间发表的论文 | 第88-89页 |
致谢 | 第89-90页 |