| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第9-11页 |
| 第一章 综述Ⅲ型干扰素研究进展 | 第11-18页 |
| 1 Ⅲ型干扰素的基因结构及其编码蛋白 | 第11-12页 |
| 2 Ⅲ型干扰素的表达和调控 | 第12-13页 |
| 3 Ⅲ型干扰素的受体和信号通路 | 第13-15页 |
| 4 Ⅲ型干扰素的生物功能概述 | 第15-18页 |
| 4.1 抗病毒活性 | 第15-16页 |
| 4.2 抗肿瘤活性 | 第16-17页 |
| 4.3 免疫调节活性 | 第17-18页 |
| 第二章 鸡λ干扰素在杆状病毒/昆虫细胞系统中表达及其抗病毒作用研究 | 第18-45页 |
| 1 材料 | 第18-22页 |
| 1.1 实验动物 | 第18-19页 |
| 1.2 病毒及细胞 | 第19页 |
| 1.3 菌种及质粒 | 第19页 |
| 1.4 主要试剂 | 第19页 |
| 1.5 主要溶液配制 | 第19-22页 |
| 1.5.1 SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)主要试剂配制 | 第19-20页 |
| 1.5.2 Western blot主要试剂配制 | 第20页 |
| 1.5.3 ELISA主要试剂配制 | 第20-21页 |
| 1.5.4 蛋白纯化主要试剂配制 | 第21页 |
| 1.5.5 其他试剂配制 | 第21-22页 |
| 1.6 主要仪器 | 第22页 |
| 2 方法 | 第22-30页 |
| 2.1 ChIFN-λ基因的克隆与序列分析 | 第22-24页 |
| 2.1.1 鸡肾脏组织总RNA提取 | 第22页 |
| 2.1.2 引物设计与合成 | 第22-23页 |
| 2.1.3 RT-PCR | 第23页 |
| 2.1.4 ChIFN-λ基因的克隆与序列分析 | 第23-24页 |
| 2.2 ChIFN-λ的原核表达 | 第24-25页 |
| 2.2.1 ChIFN-λ原核表达引物设计 | 第24页 |
| 2.2.2 ChIFN-λ成熟蛋白基因的克隆 | 第24页 |
| 2.2.3 重组质粒的构建 | 第24页 |
| 2.2.4 重组蛋白的诱导表达和条件优化 | 第24-25页 |
| 2.2.5 重组蛋白的大量诱导及纯化 | 第25页 |
| 2.3 ChIFN-λ多克隆抗体的制备 | 第25-26页 |
| 2.3.1 动物免疫 | 第25页 |
| 2.3.2 ELISA试验 | 第25-26页 |
| 2.4 表达ChIFN-λ重组杆状病毒的构建 | 第26-28页 |
| 2.4.1 gp67信号肽融合ChIFN-λ基因的扩增 | 第26-27页 |
| 2.4.2 转移载体pFastBac-gp67SP-ChIFN-λ的构建 | 第27-28页 |
| 2.4.3 转染昆虫细胞 | 第28页 |
| 2.5 重组蛋白的表达鉴定 | 第28-29页 |
| 2.5.1 间接免疫荧光实验 | 第28-29页 |
| 2.5.2 Western Blot实验 | 第29页 |
| 2.6 MTT方法检测重组ChIFN-λ的细胞毒性 | 第29页 |
| 2.7 CEK细胞的制备 | 第29页 |
| 2.8 半数组织细胞感染量测定 | 第29页 |
| 2.9 重组ChIFN-λ抗病毒活性测定 | 第29-30页 |
| 2.10 重组ChIFN-λ抗AIV、NDV效果研究 | 第30页 |
| 3 结果 | 第30-42页 |
| 3.1 ChIFN-λ的扩增及序列分析 | 第30-31页 |
| 3.1.1 ChIFN-λ全基因的RT-PCR扩增 | 第30-31页 |
| 3.1.2 测序结果及分析 | 第31页 |
| 3.2 ChIFN-λ原核表达 | 第31-34页 |
| 3.2.1 ChIFN-λ成熟蛋白基因的扩增 | 第31-32页 |
| 3.2.2 重组质粒pET-32a-ChIFN-λ的筛选和鉴定 | 第32页 |
| 3.2.3 重组蛋白表达和纯化鉴定 | 第32-33页 |
| 3.2.4 融合蛋白Western Blot检测 | 第33-34页 |
| 3.2.5 多克隆抗体的制备 | 第34页 |
| 3.3 表达ChIFN-λ重组杆状病毒的构建及鉴定 | 第34-40页 |
| 3.3.1 gp67信号肽序列扩增结果 | 第34-35页 |
| 3.3.2 ChIFN-λ去除信号肽片段的扩增 | 第35-36页 |
| 3.3.3 gp67信号肽融合ChIFN-λ基因的扩增 | 第36页 |
| 3.3.4 转移载体pFastBac-gp67SP-ChIFN-λ的酶切鉴定 | 第36-37页 |
| 3.3.5 穿梭质粒pFastBac-gp67SP-ChIFN-λ的PCR鉴定 | 第37页 |
| 3.3.6 转染Sf9细胞形态学变化 | 第37-38页 |
| 3.3.7 间接免疫荧光试验鉴定 | 第38-39页 |
| 3.3.8 重组杆状病毒Western Blot检测及抗病毒活性测定 | 第39页 |
| 3.3.9 MTT方法检测重组ChIFN-λ的细胞毒性 | 第39-40页 |
| 3.4 重组ChIFN-λ抗NDV和AIV的效果 | 第40-42页 |
| 3.4.1 ChIFN-λ抑制NDV F48E8株致细胞病变作用检测结果 | 第40-41页 |
| 3.4.2 ChIFN-λ抑制H9N2亚型AIV致细胞病变作用检测结果 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-45页 |
| 全文结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第52-53页 |
