| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-16页 |
| 1.1 漆酶概述 | 第9-11页 |
| 1.1.1 漆酶结构特点和催化机制 | 第9页 |
| 1.1.2 漆酶应用 | 第9-10页 |
| 1.1.3 漆酶的异源表达研究现状 | 第10-11页 |
| 1.2 毕赤酵母表达系统简介 | 第11-14页 |
| 1.2.1 毕赤酵母表达系统研究现状 | 第12页 |
| 1.2.2 提高外源蛋白表达量的措施 | 第12-14页 |
| 1.3 立题依据及研究意义 | 第14-15页 |
| 1.4 本论文主要研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-25页 |
| 2.1 材料 | 第16-17页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第16页 |
| 2.1.2 培养基 | 第16页 |
| 2.1.3 主要试剂及仪器 | 第16-17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-25页 |
| 2.2.1 DNA操作 | 第17-19页 |
| 2.2.2 漆酶基因的克隆及表达 | 第19-20页 |
| 2.2.3 毕赤酵母分子伴侣共表达质粒的构建及转化 | 第20-22页 |
| 2.2.4 融合双亲短肽的漆酶基因重组质粒构建及转化 | 第22-23页 |
| 2.2.5 培养方法 | 第23页 |
| 2.2.6 漆酶酶活力测定 | 第23页 |
| 2.2.7 漆酶的制备提取与分离纯化 | 第23-24页 |
| 2.2.8 蛋白浓度测定 | 第24页 |
| 2.2.9 酶学性质研究 | 第24页 |
| 2.2.10 SDS-PAGE凝胶电泳分析 | 第24-25页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第25-42页 |
| 3.1 漆酶在P. pastoris中的异源表达及发酵优化 | 第25-30页 |
| 3.1.1 漆酶在P. pastoris中的异源表达 | 第25-27页 |
| 3.1.2 PP-L菌株发酵条件优化 | 第27-30页 |
| 3.2 共表达分子伴侣对漆酶分泌的影响 | 第30-34页 |
| 3.2.1 共表达分子伴侣的选择 | 第30页 |
| 3.2.2 单个分子伴侣共表达对漆酶分泌的影响 | 第30-33页 |
| 3.2.3 组合共表达分子伴侣对漆酶分泌的影响 | 第33-34页 |
| 3.3 融合不同短肽对漆酶分泌及性质的影响 | 第34-42页 |
| 3.3.1 双亲短肽序列及特征 | 第34页 |
| 3.3.2 N端融合双亲短肽菌株的构建及转化 | 第34-36页 |
| 3.3.3 组合策略促进漆酶的高效表达 | 第36-37页 |
| 3.3.4 漆酶的纯化及酶学性质研究 | 第37-42页 |
| 结论与展望 | 第42-44页 |
| 主要结论 | 第42页 |
| 展望 | 第42-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第49页 |
