| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩写对照表 | 第12-14页 |
| 文献综述 | 第14-19页 |
| 引言 | 第19-20页 |
| 1 材料与方法 | 第20-42页 |
| 1.1 材料 | 第20-25页 |
| 1.1.1 实验动物 | 第20页 |
| 1.1.2 实验菌株，虫株和质粒 | 第20页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第20-21页 |
| 1.1.4 主要试剂 | 第21-22页 |
| 1.1.5 溶液的配置 | 第22-24页 |
| 1.1.6 培养基 | 第24-25页 |
| 1.2 GRA24和GRA25基因的PCR扩增、测序及序列分析 | 第25-30页 |
| 1.2.1 引物 | 第25页 |
| 1.2.2 虫体基因组DNA的提取 | 第25-26页 |
| 1.2.3 PCR扩增 | 第26-27页 |
| 1.2.4 琼脂糖凝胶电泳分析 | 第27页 |
| 1.2.5 PCR扩增产物的回收与纯化 | 第27页 |
| 1.2.6 PCR纯化产物的连接 | 第27-28页 |
| 1.2.7 感受态细胞（JM109）的制备 | 第28-29页 |
| 1.2.8 重组质粒的转化 | 第29页 |
| 1.2.9 重组质粒菌液PCR的鉴定 | 第29页 |
| 1.2.10 GRA24和GRA25的序列测定 | 第29页 |
| 1.2.11 序列分析 | 第29-30页 |
| 1.3 弓形虫核酸疫苗pVAX-GRA24，pVAX-GRA25的构建 | 第30-38页 |
| 1.3.1 引物 | 第30页 |
| 1.3.2 虫体基因组DNA的提取（用于GRA25基因的扩增） | 第30页 |
| 1.3.3 虫体总RNA的提取（用于GRA24基因的扩增） | 第30-31页 |
| 1.3.4 cDNA的合成 | 第31-32页 |
| 1.3.5 GRA24和GRA25 ORF序列的扩增 | 第32-33页 |
| 1.3.6 琼脂糖电泳分析 | 第33页 |
| 1.3.7 PCR产物的回收与纯化 | 第33页 |
| 1.3.8 PCR纯化产物的连接 | 第33页 |
| 1.3.9 感受态细胞（JM109）的制备 | 第33页 |
| 1.3.10 重组质粒的转化 | 第33页 |
| 1.3.11 pMD18-GRA24和pMD18-GRA25重组质粒的菌液PCR鉴定 | 第33-34页 |
| 1.3.12 质粒提取 | 第34-35页 |
| 1.3.13 pMD18-GRA24和pMD18-GRA25重组质粒的酶切鉴定 | 第35页 |
| 1.3.14 GRA24和GRA25的序列测定 | 第35页 |
| 1.3.15 pVAX I和目的片段的回收 | 第35-36页 |
| 1.3.16 感受态细胞（DH5α）的制备 | 第36页 |
| 1.3.17 连接产物的转化及转化子的鉴定 | 第36页 |
| 1.3.18 目的片段的序列测定 | 第36-37页 |
| 1.3.19 质粒的大提与纯化 | 第37-38页 |
| 1.3.20 质粒DNA的纯度检测 | 第38页 |
| 1.4 重组质粒的免疫效果评价 | 第38-42页 |
| 1.4.1 实验鼠的免疫与分组 | 第38页 |
| 1.4.2 腹腔注射感染弓形虫RH株速殖子 | 第38-39页 |
| 1.4.3 灌胃感染弓形虫PRU株 | 第39页 |
| 1.4.4 小鼠血清的制备 | 第39页 |
| 1.4.5 血清中IgG抗体及IgG1、IgG2a抗体亚类的检测 | 第39-40页 |
| 1.4.6 细胞因子的检测 | 第40-41页 |
| 1.4.7 免疫鼠脾细胞悬液的制备 | 第41页 |
| 1.4.8 免疫鼠脾淋巴细胞增殖实验（MTT法） | 第41-42页 |
| 1.4.9 CD3+CD4+CD8- 和CD3+CD8+CD4- 细胞的流式细胞分析 | 第42页 |
| 2.结果与分析 | 第42-58页 |
| 2.1 GRA24和GRA25基因的PCR扩增、测序及序列分析 | 第42-49页 |
| 2.1.1 弓形虫GRA24基因的PCR扩增结果 | 第42-44页 |
| 2.1.2 弓形虫GRA25基因的PCR扩增结果 | 第44页 |
| 2.1.3 重组质粒pMD18-GRA24的菌液PCR鉴定结果 | 第44-46页 |
| 2.1.4 重组质粒pMD18-GRA25的菌液PCR鉴定结果 | 第46页 |
| 2.1.5 GRA24基因序列的测定与分析 | 第46-47页 |
| 2.1.6 GRA25基因序列的测定与分析 | 第47-48页 |
| 2.1.7 基于GRA24基因的系统进化树的构建 | 第48页 |
| 2.1.8 基于GRA25基因的系统进化树的构建 | 第48-49页 |
| 2.2 弓形虫RH株pVAX-GRA24和pVAX-GRA25重组质粒的构建 | 第49-53页 |
| 2.2.1 弓形虫GRA24和GRA25基因PCR扩增结果 | 第49-50页 |
| 2.2.2 pMD18-GRA24重组质粒的菌液PCR扩增结果 | 第50页 |
| 2.2.3 pMD18-GRA25重组质粒的菌液PCR扩增结果 | 第50-51页 |
| 2.2.4 pMD18-GRA24重组质粒的酶切鉴定 | 第51页 |
| 2.2.5 pMD18-GRA25重组质粒的酶切鉴定 | 第51-52页 |
| 2.2.6 pVAX -GRA24真核表达重组质粒的酶切鉴定 | 第52页 |
| 2.2.7 pVAX I-GRA25真核表达重组质粒的酶切鉴定 | 第52-53页 |
| 2.3 重组质粒的免疫效果评价结果 | 第53-58页 |
| 2.3.1 免疫前后实验鼠血清中IgG抗体水平的变化 | 第53-54页 |
| 2.3.2 免疫前后实验鼠血清中IgG1、IgG2a抗体亚类水平的变化 | 第54页 |
| 2.3.3 细胞因子检测结果 | 第54-55页 |
| 2.3.3.1 IFN-γ检测结果 | 第54-55页 |
| 2.3.3.2 IL-2 检测结果 | 第55页 |
| 2.3.3.3 IL-4 和IL-10 检测结果 | 第55页 |
| 2.3.3.4 IL-12p70和IL-23 检测结果 | 第55页 |
| 2.3.4 MTT及流式细胞检测结果 | 第55-56页 |
| 2.3.5 小鼠腹腔感染弓形虫RH株死亡时间 | 第56-57页 |
| 2.3.6 小鼠感染PRU株的脑包囊减少率 | 第57-58页 |
| 3 讨论 | 第58-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 作者简介 | 第69页 |
