| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩写及符号 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-19页 |
| 1.1 南方大豆的土壤环境 | 第11页 |
| 1.2 植物耐低磷胁响应机制 | 第11-12页 |
| 1.3 实时荧光定量PCR简介 | 第12-13页 |
| 1.4 内参基因筛选的必要性 | 第13-14页 |
| 1.5 内参基因稳定性分析方法 | 第14-15页 |
| 1.6 谷胱甘肽及其代谢的研究进展 | 第15-18页 |
| 1.7 液质联用技术的优势 | 第18页 |
| 1.8 实验的目的与意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-31页 |
| 2.1 实验材料和胁迫处理 | 第19页 |
| 2.2 仪器和试剂 | 第19页 |
| 2.3 RNA提取和保存 | 第19-21页 |
| 2.3.1 RNA的提取和逆转录 | 第19-20页 |
| 2.3.2 DNA的去除 | 第20页 |
| 2.3.3 RNA质量检测 | 第20页 |
| 2.3.4 cDNA的合成 | 第20-21页 |
| 2.4 内参基因RT-qPCR | 第21-25页 |
| 2.4.1 内参基因引物的设计和合成 | 第21-23页 |
| 2.4.2 内参基因引物梯度PCR | 第23页 |
| 2.4.3 内参基因标准曲线制作 | 第23-25页 |
| 2.5 目的基因实验方法 | 第25-28页 |
| 2.5.1 目的基因引物设计 | 第25页 |
| 2.5.2 目的基因克隆与转化 | 第25-28页 |
| 2.6 γ-ECS和hGSHS酶活性的测定 | 第28-29页 |
| 2.6.1 实验方法 | 第28-29页 |
| 2.6.2 数据处理 | 第29页 |
| 2.7 液质联用法测定hGSH和hPCn(n=2～11) | 第29-31页 |
| 3 结果 | 第31-47页 |
| 3.1 大豆RNA提取 | 第31页 |
| 3.2 内参基因PCR结果电泳检测 | 第31页 |
| 3.3 扩增效率分析 | 第31-32页 |
| 3.4 Ct的可靠性分析 | 第32-34页 |
| 3.5 内参基因的稳定性分析 | 第34-42页 |
| 3.5.1 GeNorm分析法 | 第34-37页 |
| 3.5.2 NormFinder分析法 | 第37-39页 |
| 3.5.3 △Ct对比分析法 | 第39-40页 |
| 3.5.4 BestKeeper分析法 | 第40页 |
| 3.5.5 RefFinder分析法 | 第40-42页 |
| 3.6 目的基因实验结果 | 第42-44页 |
| 3.6.1 γ-ECS荧光定量PCR分析 | 第42-43页 |
| 3.6.2 hGSHS荧光定量PCR结果 | 第43-44页 |
| 3.7 γ-ECS和hGSHS酶活检测结果 | 第44-45页 |
| 3.8 hGSH和hPCn检测结果 | 第45-47页 |
| 4 讨论与分析 | 第47-55页 |
| 4.1 荧光定量PCR技术 | 第47-49页 |
| 4.2 内参基因筛选软件的分析 | 第49-51页 |
| 4.3 内参基因稳定性分析 | 第51-52页 |
| 4.4 低磷胁迫谷胱丙肽合成代谢与抗逆性 | 第52-54页 |
| 4.5 hPCs含量结果分析 | 第54-55页 |
| 5 结论 | 第55-56页 |
| 6 创新点与展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-67页 |
| 附录 | 第67-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 攻读学位期间发表的论文目录 | 第77页 |