| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 第一章 大肠杆菌DnaA蛋白研究进展(文献综述) | 第11-20页 |
| 1.1 引言 | 第11页 |
| 1.2 DnaA蛋白的结构 | 第11-14页 |
| 1.3 DnaA蛋白的存在形式 | 第14-15页 |
| 1.4 ATP-DnaA水平的改变依赖于细胞周期 | 第15-18页 |
| 1.4.1 ATP-DnaA的水解 | 第15-17页 |
| 1.4.1.1 RIDA系统介导的ATP-DnaA水解 | 第15-16页 |
| 1.4.1.2 DDAH介导的ATP-DnaA水解 | 第16-17页 |
| 1.4.2 ADP-DnaA的激活 | 第17-18页 |
| 1.5 ATP-DnaA和ADP-DnaA相互转换的作用 | 第18-19页 |
| 1.5.1 复制起始中的作用 | 第18页 |
| 1.5.2 基因转录调控中的作用 | 第18-19页 |
| 1.6 结语 | 第19-20页 |
| 第二章 DnaA蛋白介导的基因表达调控机制 | 第20-81页 |
| 2.1 引言 | 第20-23页 |
| 2.1.1 DnaA蛋白是转录因子 | 第20页 |
| 2.1.2 uvrB基因与SOS应答 | 第20-21页 |
| 2.1.3 his操纵子的转录衰减 | 第21-22页 |
| 2.1.4 研究目的与意义 | 第22-23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-37页 |
| 2.2.1 菌种和质粒 | 第23-25页 |
| 2.2.2 引物 | 第25-27页 |
| 2.2.3 主要培养基的配制 | 第27-29页 |
| 2.2.4 主要试剂来源及其配制 | 第29-37页 |
| 2.2.4.1 主要试剂来源 | 第29-30页 |
| 2.2.4.2 主要试剂的配制 | 第30-37页 |
| 2.3 实验方法 | 第37-55页 |
| 2.3.1 质粒构建 | 第37-39页 |
| 2.3.2 感受态细胞制备及转化 | 第39页 |
| 2.3.3 一步失活法构建报告型菌株和删除突变菌株 | 第39-40页 |
| 2.3.4 P1转导 | 第40页 |
| 2.3.5 Miller法测定β-半乳糖苷酶活性检测 | 第40-41页 |
| 2.3.6 Western Blot鉴定 | 第41-42页 |
| 2.3.7 LexA-His_6的表达及纯化 | 第42-44页 |
| 2.3.8 DnaA蛋白的表达及纯化 | 第44-46页 |
| 2.3.9 足迹实验(Footprinting Assay) | 第46-51页 |
| 2.3.10 流式细胞仪分析细胞DNA复制式样 | 第51页 |
| 2.3.11 细胞倍增时间(doubling time)的测定 | 第51页 |
| 2.3.12 荧光共聚焦扫描显微镜测量细胞长度与类核分布 | 第51页 |
| 2.3.13 体外转录获得组氨酸操纵子前导区RNA | 第51-53页 |
| 2.3.14 体外检测RNA-DnaA相互作用 | 第53-55页 |
| 2.4 结果 | 第55-76页 |
| 2.4.1 DnaA和LexA对uvrB和其他SOS基因的表达调控及其意义 | 第55-71页 |
| 2.4.1.1 DnaA和LexA蛋白抑制uvrB基因表达 | 第55-56页 |
| 2.4.1.2 uvrBp1-2启动子对uvrB基因表达调控起主要作用 | 第56-57页 |
| 2.4.1.3 LexA蛋白是uvrBp3启动子的主要负调节因子 | 第57-59页 |
| 2.4.1.4 lexA基因缺失使uvrBp1-3启动子对DnaA更敏感 | 第59-60页 |
| 2.4.1.5 uvrB启动子区域包含7个DnaA-box和4个LexA-box | 第60-61页 |
| 2.4.1.6 DnaA蛋白干扰LexA对LexA-box2和3的结合 | 第61-63页 |
| 2.4.1.7 DnaA对uvrBp3启动子的抑制作用依赖于DnaA-box6 | 第63-65页 |
| 2.4.1.8 LexA对uvrBp1-2启动子的抑制主要依赖LexA-box1 | 第65页 |
| 2.4.1.9 删除LexA-box2和3提升uvrBp1-3转录水平 | 第65-66页 |
| 2.4.1.10 UV照射提高uvrB基因表达水平 | 第66-67页 |
| 2.4.1.11 同时缺失DnaA-和LexA-阻遏导致细胞变长和复制受阻 | 第67-69页 |
| 2.4.1.12 DnaA和LexA蛋白抑制其他SOS基因的表达 | 第69-71页 |
| 2.4.2 DnaA对his操纵子的表达调控依赖于his茎环结构 | 第71-76页 |
| 2.4.2.1 过表达DnaA抑制his操纵子的表达 | 第71-72页 |
| 2.4.2.2 组氨酸饥饿条件下his茎环结构的删除提升his操纵子的表达 | 第72-73页 |
| 2.4.2.3 DnaA对his操纵子的表达调控依赖于his茎环结构 | 第73-74页 |
| 2.4.2.4 体外未发现DnaA与hisL-SL RNA的相互作用 | 第74-76页 |
| 2.5 讨论 | 第76-81页 |
| 2.5.1 DnaA与LexA通过协同控制SOS调节子表达来确保基因组稳定性 | 第76-79页 |
| 2.5.1.1 DnaA和LexA协同调控uvrB基因和其他SOS基因 | 第76-77页 |
| 2.5.1.2 DnaA如何干扰LexA对LexA-box的结合? | 第77页 |
| 2.5.1.3 DnaA可能协同DNA复制与DNA修复 | 第77-78页 |
| 2.5.1.4 SOS应急反应中DnaA通过抑制SOS基因表达来确保基因组稳定性 | 第78页 |
| 2.5.1.5 DnaA和LexA调控SOS调节子表达的模型 | 第78-79页 |
| 2.5.2 DnaA通过影响his茎环结构来调节his操纵子表达 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 攻读博士期间发表论文 | 第88页 |
