| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-29页 |
| 1.1 α-淀粉酶概述 | 第8-14页 |
| 1.1.1 淀粉酶的分类 | 第8-9页 |
| 1.1.2 α-淀粉酶的特性 | 第9-11页 |
| 1.1.3 α-淀粉酶的来源与生产 | 第11-12页 |
| 1.1.4 α-淀粉酶的应用 | 第12-13页 |
| 1.1.5 α-淀粉酶分子改造 | 第13-14页 |
| 1.2 B. subtilis表达系统 | 第14-27页 |
| 1.2.1 B. subtilis概述 | 第14-15页 |
| 1.2.2 蛋白生产和分泌过程 | 第15-21页 |
| 1.2.3 促进异源蛋白在B. subtilis中分泌表达的策略 | 第21-27页 |
| 1.3 总结与展望 | 第27页 |
| 1.4 本论文的研究内容与意义 | 第27-29页 |
| 第二章 α-淀粉酶异源表达和定点突变 | 第29-52页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第29-35页 |
| 2.1.1 菌种、质粒及引物 | 第29-30页 |
| 2.1.2 培养基 | 第30-31页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第31-32页 |
| 2.1.4 主要溶液 | 第32-34页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第34-35页 |
| 2.2 实验方法 | 第35-44页 |
| 2.2.1 重组菌株构建方法 | 第35-39页 |
| 2.2.2 AmyL编码基因定点突变 | 第39-40页 |
| 2.2.3 菌株培养方法 | 第40-41页 |
| 2.2.4 分析方法 | 第41-44页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第44-50页 |
| 2.3.1 α-淀粉酶（AmyL和AmyS）在B. subtilis中的表达 | 第44-46页 |
| 2.3.2 AmyLM1，AmyLM2和AmyLMD在B. subtilis中的表达 | 第46-47页 |
| 2.3.3 AmyL和AmyLM2的酶学特性研究 | 第47-50页 |
| 2.4 小结 | 第50-52页 |
| 第三章 α-淀粉酶启动子和信号肽优化 | 第52-62页 |
| 3.1 实验材料与仪器 | 第52-54页 |
| 3.1.1 菌种、质粒和引物 | 第52-54页 |
| 3.1.2 培养基 | 第54页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第54页 |
| 3.1.4 主要溶液 | 第54页 |
| 3.1.5 主要仪器 | 第54页 |
| 3.2 实验方法 | 第54-57页 |
| 3.2.1 简单质粒克隆方法 | 第54-55页 |
| 3.2.2 AmyLM2启动子的替换 | 第55-56页 |
| 3.2.3 AmyLM2信号肽的替换 | 第56页 |
| 3.2.4 AmyS的启动子和信号肽的替换 | 第56页 |
| 3.2.5 菌株培养方法 | 第56页 |
| 3.2.6 分析方法 | 第56-57页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第57-60页 |
| 3.3.1 启动子对AmyLM2表达的影响 | 第57-58页 |
| 3.3.2 信号肽对AmyLM2分泌的影响 | 第58-60页 |
| 3.3.3 启动子P_(aprE)与信号肽SP_(nprE)在AmyS表达上的验证 | 第60页 |
| 3.4 小结 | 第60-62页 |
| 第四章 Sec分泌途径瓶颈的鉴定 | 第62-95页 |
| 4.1 实验材料与仪器 | 第62-71页 |
| 4.1.1 菌种、质粒和引物 | 第62-70页 |
| 4.1.2 培养基 | 第70页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第70页 |
| 4.1.4 主要溶液 | 第70-71页 |
| 4.1.5 主要仪器 | 第71页 |
| 4.2 实验方法 | 第71-74页 |
| 4.2.1 Real-time PCR方法 | 第71-72页 |
| 4.2.2 整合载体的构建 | 第72-73页 |
| 4.2.3 单独过表达整合载体的构建 | 第73页 |
| 4.2.4 PrsA过表达水平优化 | 第73-74页 |
| 4.2.5 组合过表达质粒的构建 | 第74页 |
| 4.2.6 分批-补料发酵罐实验 | 第74页 |
| 4.3 分析方法 | 第74-75页 |
| 4.3.1 耐热 β-半乳糖苷酶测定方法 | 第74-75页 |
| 4.3.2 其他分析方法 | 第75页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第75-93页 |
| 4.4.1 基因双过表达整合系统的构建 | 第75-79页 |
| 4.4.2 Sec途径单基因过表达对 α-淀粉酶分泌的影响 | 第79-84页 |
| 4.4.3 PrsA过表达水平的优化 | 第84-86页 |
| 4.4.4 PrsA与其他基因组合过表达的影响 | 第86-90页 |
| 4.4.5 出发菌株与工程菌株特性比较 | 第90-92页 |
| 4.4.6 分批-补料发酵罐结果 | 第92-93页 |
| 4.5 小结 | 第93-95页 |
| 第五章 论文总结与展望 | 第95-98页 |
| 5.1 本文结论 | 第95-96页 |
| 5.2 创新点 | 第96-97页 |
| 5.3 展望 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-107页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第107-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
