| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 1 文献综述 | 第8-14页 |
| ·梨石细胞的研究进展 | 第8-9页 |
| ·梨石细胞与果实品质的关系 | 第8-9页 |
| ·梨石细胞的发育过程 | 第9页 |
| ·木质素代谢的进展 | 第9-11页 |
| ·木质素的代谢途径 | 第9-10页 |
| ·木质素合成的关键酶 | 第10页 |
| ·石细胞与木质素的关系 | 第10-11页 |
| ·咖啡酸氧甲基转移酶的研究进展 | 第11-12页 |
| ·咖啡酸氧甲基转移酶的基因克隆 | 第11页 |
| ·咖啡酸氧甲基转移酶的原核表达 | 第11页 |
| ·咖啡酸氧甲基转移酶的时空表达特异性 | 第11-12页 |
| ·咖啡酸氧甲基转移酶的的遗传转化与功能 | 第12页 |
| ·研究意义 | 第12-14页 |
| 2 引言 | 第14-15页 |
| 3 材料与方法 | 第15-28页 |
| ·实验材料 | 第15页 |
| ·植物材料 | 第15页 |
| ·菌株和载体 | 第15页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第15-16页 |
| ·主要试剂 | 第15页 |
| ·主要仪器 | 第15-16页 |
| ·实验设计与技术路线 | 第16-17页 |
| ·实验方法 | 第17-28页 |
| ·大肠杆菌LB培养基的配制 | 第17页 |
| ·抗生素储备液的配制 | 第17页 |
| ·砀山酥梨总RNA的提取 | 第17-18页 |
| ·RNA质量检测 | 第18页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第18-19页 |
| ·PbCOMT基因中间片段的克隆 | 第19-20页 |
| ·PbCOMT基因的3’Full RACE反应 | 第20-21页 |
| ·PbCOMT基因的5’Full RACE反应 | 第21页 |
| ·PbCOMT基因的PCR产物回收 | 第21-22页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态制备 | 第22页 |
| ·连接与转化 | 第22页 |
| ·质粒提取 | 第22-23页 |
| ·PbCOMT基因的生物信息学分析 | 第23页 |
| ·PbCOMT基因原核表达载体的构建 | 第23-24页 |
| ·His-PbCOMT融合蛋白的诱导表达及检测 | 第24-25页 |
| ·His-PbCOMT融合蛋白表达条件优化 | 第25页 |
| ·PbCOMT基因的实时荧光定量表达 | 第25-26页 |
| ·PbCOMT基因真核表达载体的构建 | 第26-27页 |
| ·PbCOMT蛋白的亚细胞定位 | 第27-28页 |
| 4 结果与分析 | 第28-48页 |
| ·砀山酥梨果实总RNA的提取 | 第28页 |
| ·PbCOMT基因全长的克隆 | 第28-32页 |
| ·PbCOMT基因保守片段的扩增 | 第28-29页 |
| ·PbCOMT基因3’Full RACE扩增 | 第29-30页 |
| ·PbCOMT基因5’Full RACE扩增 | 第30-31页 |
| ·PbCOMT基因的PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·PbCOMT基因的生物信息学分析 | 第32-40页 |
| ·氨基酸序列保守性分析 | 第32-33页 |
| ·系统进化树分析 | 第33-35页 |
| ·PbCOMT的二级结构分析 | 第35-36页 |
| ·PbCOMT的疏水性分析 | 第36-37页 |
| ·PbCOMT的跨膜结构分析 | 第37-38页 |
| ·PbCOMT的信号肽预测分析 | 第38-39页 |
| ·PbCOMT的功能结构域分析 | 第39页 |
| ·PbCOMT的同源建模 | 第39-40页 |
| ·PbCOMT基因的原核表达分析 | 第40-44页 |
| ·PbCOMT基因原核表达载体的构建及鉴定 | 第40-41页 |
| ·His-PbCOMT融合蛋白的表达 | 第41-42页 |
| ·原核表达条件优化 | 第42-44页 |
| ·PbCOMT基因的荧光定量表达分析 | 第44-45页 |
| ·不同发育时期PbCOMT基因的表达 | 第44-45页 |
| ·不同部位PbCOMT基因的表达 | 第45页 |
| ·PbCOMT基因真核表达载体的构建及鉴定 | 第45-47页 |
| ·1301-PbCOMT-EGFP的亚细胞定位 | 第47-48页 |
| 5 讨论 | 第48-50页 |
| ·PbCOMT的生物信息学分析 | 第48-49页 |
| ·PbCOMT的原核表达分析 | 第49页 |
| ·PbCOMT的荧光定最表达分析 | 第49页 |
| ·1301-PbCOMT-EGFP的亚细胞定位分析 | 第49-50页 |
| 6 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 附录 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 作者简介 | 第58页 |
| 在读期间发表的论文 | 第58页 |