| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-14页 |
| ·蛋白重组及融合标签的应用 | 第9-10页 |
| ·烟草蚀斑病毒蛋白酶的研究 | 第10-11页 |
| ·大肠杆菌密码子偏爱性分析 | 第11-14页 |
| 2 引言 | 第14-15页 |
| ·研究目的和意义 | 第14页 |
| ·研究内容 | 第14-15页 |
| 3 材料与方法 | 第15-23页 |
| ·材料 | 第15-17页 |
| ·菌株和质粒 | 第15页 |
| ·试剂 | 第15页 |
| ·仪器和设备 | 第15页 |
| ·部分缓冲液的配置 | 第15-16页 |
| ·本研究中所需要的引物 | 第16-17页 |
| ·方法 | 第17-23页 |
| ·质粒及表达载体的构建 | 第17-18页 |
| ·双组氨酸pET-TEVp~(2M)重组蛋白的诱导表达及纯化 | 第18-19页 |
| ·氨基酸突变体蛋白的分析 | 第19-20页 |
| ·重组融合底物的纯化及不同反应条件下的活性分析 | 第20页 |
| ·不同反应条件下TEVp的活性分析 | 第20页 |
| ·不同培养条件下TEVp的表达量及活性分析 | 第20-21页 |
| ·TEVp精氨酸密码同义突变体的表达分析 | 第21-22页 |
| ·稀有tRNA丰度对同义突变体的表达水平影响分析 | 第22页 |
| ·同义密码突变体的翻译起始表达量分析 | 第22页 |
| ·稀有精氨酸密码子突变体的酶活及底物专一性分析 | 第22-23页 |
| 4 结果与分析 | 第23-39页 |
| ·同义密码突变体的获得 | 第23-24页 |
| ·重组双组氨酸TEVp~(2M)的表达纯化及催化常数分析 | 第24-25页 |
| ·重组融合底物的纯化及不同反应条件下的活性分析 | 第25-26页 |
| ·不同反应条件下的TEVp氨基酸突变体酶活性分析 | 第26-28页 |
| ·不同培养条件下TEVp的表达和活性分析 | 第28-31页 |
| ·不同培养温度下TEVp的表达和活性分析 | 第28-29页 |
| ·分子伴侣共表达下TEVp的表达与活性分析 | 第29-31页 |
| ·不同密码子突变体表达水平的定性分析 | 第31页 |
| ·不同密码子突变体表达水平的定量分析 | 第31-33页 |
| ·稀有tRNA丰度对不同突变体的表达影响分析 | 第33-34页 |
| ·同义密码突变体的翻译起始表达量分析 | 第34-35页 |
| ·稀有精氨酸密码子突变体的酶活及底物专一性分析 | 第35-39页 |
| ·突变体破碎上清的酶活分析 | 第35-37页 |
| ·TEVp~(5M)及突变体的底物专一性分析 | 第37-39页 |
| 5 讨论 | 第39-42页 |
| ·氨基酸突变体不同条件下的功能稳定性研究 | 第39页 |
| ·密码子突变体的表达 | 第39-40页 |
| ·稀有tRNA丰度对密码子突变体的表达性质研究 | 第40页 |
| ·tRNA丰度和同义突变对TEVp的酶学性质研究 | 第40-42页 |
| 6 结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 个人简介 | 第53页 |