摘要 | 第1-9页 |
ABSTRACT | 第9-11页 |
缩略词表(Abbreviation) | 第11-12页 |
第一篇 文献综述 | 第12-34页 |
1 兔出血症病毒 | 第12-17页 |
·RHD的发病史 | 第12-13页 |
·RHDV的分类 | 第13页 |
·RHDV病原 | 第13-15页 |
·临床症状和病理变化 | 第15页 |
·RHDV的流行病学 | 第15-16页 |
·预防,控制和预防接种 | 第16页 |
·RHDV的治疗应用 | 第16-17页 |
·小结 | 第17页 |
2 病毒样颗粒 | 第17-24页 |
·病毒样颗粒的起源 | 第18页 |
·病毒样颗粒的特点 | 第18页 |
·病毒样颗粒的表达系统 | 第18-21页 |
·嵌合VLPs的产生 | 第21页 |
·VLPs疫苗的生产应用 | 第21-24页 |
参考文献 | 第24-34页 |
第二篇 实验部分 | 第34-82页 |
第一章 三种携带双串联OVA T细胞表位的重组穿梭载体的构建 | 第34-56页 |
1 材料与方法 | 第34-44页 |
·质粒、细胞、菌种 | 第34页 |
·主要试剂与工具酶 | 第34-35页 |
·核酸序列分析 | 第35页 |
·引物设计 | 第35-36页 |
·构建示意图 | 第36-37页 |
·目的片段的构建 | 第37-42页 |
·穿梭载体Bacmid的构建 | 第42-44页 |
2 实验结果 | 第44-49页 |
·目的基因的构建 | 第44-46页 |
·重组表达载体的酶切鉴定 | 第46-47页 |
·目的基因pFastBac1-DC的构建 | 第47-48页 |
·重组质粒的酶切鉴定 | 第48-49页 |
·重组穿梭载体鉴定 | 第49页 |
3 讨论 | 第49-52页 |
·SOE技术 | 第49-50页 |
·外源表位插入位置的选择 | 第50-52页 |
参考文献 | 第52-56页 |
第二章 三种嵌合蛋白的表达及鉴定 | 第56-68页 |
1 材料与方法 | 第56-60页 |
·质粒、菌株与细胞 | 第56页 |
·主要试剂与工具酶 | 第56-57页 |
·重组穿梭载体转染Sf9细胞 | 第57页 |
·重组杆状病毒的初步鉴定 | 第57-59页 |
·表达产物的鉴定 | 第59-60页 |
2 结果 | 第60-63页 |
·转染 | 第60页 |
·RT-PCR鉴定重组病毒的mRNA | 第60-61页 |
·血凝实验 | 第61-62页 |
·免疫荧光 | 第62页 |
·重组蛋白的表达及免疫印迹鉴定 | 第62-63页 |
3 讨论 | 第63-65页 |
·嵌合蛋白载体和外源表位的表达 | 第63-64页 |
·表达系统的选择 | 第64页 |
·嵌合蛋白的血凝特性 | 第64-65页 |
参考文献 | 第65-68页 |
第三章 嵌合蛋白的自聚能力和免疫原性研究 | 第68-82页 |
1 材料与方法 | 第68-71页 |
·试剂、培养基和病毒 | 第68-69页 |
·实验动物 | 第69页 |
·病毒样颗粒的电镜观察 | 第69页 |
·嵌合蛋白免疫原性的研究 | 第69-71页 |
2 结果 | 第71-75页 |
·电镜观察 | 第71-72页 |
·嵌合蛋白载体特异性抗体效价的测定 | 第72-73页 |
·ELISPOT检测特异性IFN-γ分泌 | 第73-75页 |
3 讨论 | 第75-78页 |
·病毒样颗粒的形成 | 第75-76页 |
·免疫原性的研究 | 第76-78页 |
参考文献 | 第78-82页 |
全文总结 | 第82-84页 |
附录 | 第84-88页 |
致谢 | 第88页 |