| 致谢 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-20页 |
| ·光合细菌概述 | 第12-15页 |
| ·光合细菌 | 第12页 |
| ·光合细菌分类 | 第12-14页 |
| ·光合玫瑰菌 | 第14-15页 |
| ·3-羟基丙酸途径的概述 | 第15-17页 |
| ·二氧化碳固定途径 | 第15页 |
| ·3-羟基丙酸途径的发现和早期研究 | 第15-16页 |
| ·丙二酸单酰辅酶A还原酶 | 第16-17页 |
| ·论文研究意义和技术路线 | 第17-20页 |
| ·论文研究意义 | 第17页 |
| ·实验设计思路 | 第17-18页 |
| ·实验主要内容 | 第18-19页 |
| ·技术路线 | 第19-20页 |
| 第二章 目的蛋白的基因克隆 | 第20-31页 |
| ·实验材料 | 第20-22页 |
| ·主要实验仪器 | 第20页 |
| ·主要实验试剂 | 第20-21页 |
| ·培养基和实验试剂的配制 | 第21-22页 |
| ·载体结构图 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-28页 |
| ·光合玫瑰菌Roseiflexus.castenholzii DSM 13941的培养 | 第22-23页 |
| ·Roseiflexus.castenholzii细菌基因组的提取 | 第23页 |
| ·目的片段PCR扩增 | 第23-24页 |
| ·PCR产物的凝胶回收 | 第24-25页 |
| ·重组质粒pEASY-E1-mcr的构建 | 第25页 |
| ·重组质粒pEASY-E1-mcr转化感受态Trans1-T1 | 第25页 |
| ·菌落PCR筛选阳性重组子 | 第25-26页 |
| ·重组质粒pEASY-E1-mcr的提取 | 第26-27页 |
| ·重组质粒pEASY-E1-mcr转化感受态细胞BL21(DE3) | 第27页 |
| ·阳性重组子的筛选 | 第27-28页 |
| ·实验结果 | 第28-30页 |
| ·目的基因mcr的PCR扩增 | 第28页 |
| ·PCR产物的切胶回收 | 第28-29页 |
| ·重组质粒转化感受态细胞Trans1-T1及菌落PCR筛选 | 第29页 |
| ·重组质粒转化感受态细胞BL21(DE3)及菌落PCR筛选 | 第29-30页 |
| ·小结与讨论 | 第30-31页 |
| 第三章 目的蛋白MCR的生物信息学分析 | 第31-36页 |
| ·实验材料和仪器 | 第31页 |
| ·MCR的生物信息学分析 | 第31页 |
| ·蛋白质的理化性质 | 第31页 |
| ·蛋白质的可溶性和疏水性分析 | 第31页 |
| ·蛋白质的信号肽分析 | 第31页 |
| ·蛋白质的结构功能域分析 | 第31页 |
| ·实验结果 | 第31-35页 |
| ·蛋白质的理化性质 | 第31-32页 |
| ·蛋白质的可溶性和疏水性分析 | 第32-33页 |
| ·蛋白质的信号肽分析 | 第33-34页 |
| ·蛋白质的结构功能域分析 | 第34-35页 |
| ·小结与讨论 | 第35-36页 |
| 第四章 目的蛋白的表达与纯化 | 第36-49页 |
| ·实验材料 | 第36-38页 |
| ·主要实验仪器 | 第36-37页 |
| ·主要实验试剂 | 第37页 |
| ·试剂的配制 | 第37-38页 |
| ·实验方法 | 第38-43页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶的配制 | 第38-39页 |
| ·IPTG诱导目的蛋白MCR的表达 | 第39页 |
| ·目的蛋白MCR表达位置的确定 | 第39-40页 |
| ·目的蛋白MCR的纯化 | 第40-42页 |
| ·Western blot检测目的蛋白 | 第42-43页 |
| ·实验结果 | 第43-48页 |
| ·诱导表达目的蛋白MCR表达位置的确定 | 第43页 |
| ·诱导表达目的蛋白MCR的初步热处理纯化 | 第43-44页 |
| ·诱导表达目的蛋白MCR的亲和层析 | 第44-45页 |
| ·诱导表达目的蛋白MCR的离子交换层析 | 第45-46页 |
| ·诱导表达目的蛋白MCR的凝胶过滤 | 第46-47页 |
| ·Western blot检测目的蛋白 | 第47-48页 |
| ·小结与讨论 | 第48-49页 |
| 第五章 多克隆抗体Western印迹分析 | 第49-55页 |
| ·实验材料 | 第49-50页 |
| ·主要实验仪器 | 第49页 |
| ·主要实验试剂 | 第49页 |
| ·试剂的配制 | 第49-50页 |
| ·实验方法 | 第50-52页 |
| ·纯化浓缩后目的蛋白MCR浓度的测量 | 第50页 |
| ·多克隆抗体制备 | 第50-51页 |
| ·多克隆抗体的western Blot | 第51-52页 |
| ·实验结果 | 第52-54页 |
| ·纯化浓缩目的蛋白MCR的浓度 | 第52页 |
| ·多克隆抗体的质检结果 | 第52-53页 |
| ·多克隆抗体的western印迹 | 第53-54页 |
| ·小结与讨论 | 第54-55页 |
| 第六章 目的蛋白MCR的结晶 | 第55-60页 |
| ·实验材料 | 第55-56页 |
| ·主要实验仪器 | 第55页 |
| ·主要实验试剂 | 第55-56页 |
| ·试验方法 | 第56-57页 |
| ·蛋白质的浓缩 | 第56页 |
| ·MCR晶体生长条件的筛选——悬滴气相扩散法 | 第56页 |
| ·晶体生长条件的优化 | 第56-57页 |
| ·实验结果 | 第57-58页 |
| ·MCR晶体的电子显微镜照片 | 第57页 |
| ·MCR晶体的X-射线衍射图 | 第57-58页 |
| ·晶体生长条件的优化 | 第58页 |
| ·小结与讨论 | 第58-60页 |
| 第七章 结论与展望 | 第60-62页 |
| ·结论 | 第60页 |
| ·展望 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-65页 |
| 缩略语 | 第65页 |
