| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 1 前言 | 第8-19页 |
| ·黑曲霉 | 第8页 |
| ·肉碱乙酰转移酶 | 第8-10页 |
| ·肉碱乙酰转移酶作用机制 | 第8-10页 |
| ·肉碱乙酰转移酶研究进展 | 第10页 |
| ·黑曲霉基因功能的研究进展 | 第10页 |
| ·基因敲除技术 | 第10-12页 |
| ·基因敲除原理 | 第10-11页 |
| ·同源重组 | 第11页 |
| ·基因敲除的载体设计 | 第11页 |
| ·基因敲除技术的应用 | 第11-12页 |
| ·丝状真菌转化系统 | 第12-16页 |
| ·可用于转化的丝状真菌种类 | 第12页 |
| ·用于丝状真菌转化的方法 | 第12-14页 |
| ·丝状真菌转化的选择标记 | 第14-15页 |
| ·丝状真菌转化所用到的载体 | 第15页 |
| ·丝状真菌转化的特点 | 第15-16页 |
| ·基因破坏和置换 | 第16-17页 |
| ·论文的立题背景及研究内容 | 第17-19页 |
| ·立题背景 | 第17页 |
| ·研究目的与意义 | 第17-18页 |
| ·研究内容 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-34页 |
| ·实验材料 | 第19-24页 |
| ·菌株与质粒 | 第19页 |
| ·工具酶及相关试剂 | 第19-21页 |
| ·培养基、试剂配制和抗生素 | 第21-23页 |
| ·主要仪器和设备 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-34页 |
| ·黑曲霉(Aspergillus niger ATCC1015)基因组DNA的提取 | 第24页 |
| ·琼脂糖DNA凝胶电泳 | 第24页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
| ·双元载体pFGL59Ble的构建 | 第25-29页 |
| ·质粒pCAT1的构建 | 第29页 |
| ·质粒pCAT2的构建 | 第29-30页 |
| ·农杆菌电转化 | 第30-31页 |
| ·农杆菌介导的黑曲霉转化 | 第31-32页 |
| ·黑曲霉转化子的验证 | 第32-33页 |
| ·黑曲霉的DAPI细胞核染色 | 第33页 |
| ·柠檬酸产量的测定 | 第33-34页 |
| 3 结果与讨论 | 第34-51页 |
| ·黑曲霉(Aspergillus niger ATCC1015)基因组的提取 | 第34页 |
| ·元载体pFGL59Ble的构建 | 第34-37页 |
| ·目的片段的扩增 | 第35页 |
| ·PtrpC-ble片段与p59载体的酶切、连接 | 第35-37页 |
| ·黑曲霉cat1基因敲除突变株的构建 | 第37-41页 |
| ·pCAT1基因敲除载体构建 | 第37-40页 |
| ·cat1敲除突变株的筛选 | 第40-41页 |
| ·黑曲霉cat2基因敲除突变株的构建 | 第41-45页 |
| ·pCAT2基因敲除载体构建 | 第41-44页 |
| ·cat2敲除突变株的筛选 | 第44-45页 |
| ·野生株与突变株的形态比较及产孢分析 | 第45-47页 |
| ·A. niger野生株与突变株细胞核染色的观察 | 第47-48页 |
| ·野生株与突变株对不同碳源的利用情况 | 第48-49页 |
| ·A.niger野生株、突变株柠檬酸产量分析 | 第49-51页 |
| 4 结论 | 第51-52页 |
| 5 展望 | 第52-53页 |
| 6 参考文献 | 第53-60页 |
| 7 攻读硕士研究生学位期间发表论文情况 | 第60-61页 |
| 8 致谢 | 第61页 |