| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| 第1章 前言 | 第11-23页 |
| ·功能性甜味剂简介 | 第11页 |
| ·功能性甜味剂 | 第11-12页 |
| ·D-塔格糖的生理功能 | 第12-13页 |
| ·低能量 | 第12页 |
| ·降血糖 | 第12页 |
| ·改善肠道菌群 | 第12-13页 |
| ·抗龋齿 | 第13页 |
| ·D-塔格糖的应用 | 第13-14页 |
| ·在食品中的应用 | 第13页 |
| ·在医药化妆品中的应用 | 第13-14页 |
| ·D-塔格糖的生产制备 | 第14-16页 |
| ·D-塔格糖的天然提取 | 第14-15页 |
| ·D-塔格糖制备的化学方法 | 第15页 |
| ·D-塔格糖制备的生物方法 | 第15-16页 |
| ·乳糖酶 | 第16-18页 |
| ·乳糖酶简介 | 第16页 |
| ·乳糖酶的来源 | 第16-17页 |
| ·乳糖酶的应用 | 第17-18页 |
| ·乳糖酶的国内外研究现状和进展 | 第18页 |
| ·大肠杆菌L-阿拉伯糖异构酶 | 第18-20页 |
| ·L-阿拉伯糖异构酶的催化机理 | 第19页 |
| ·L-阿拉伯糖异构酶的底物专一性 | 第19-20页 |
| ·研究意义及流程 | 第20-23页 |
| 第2章 β-半乳糖苷酶基因的克隆重组 | 第23-31页 |
| ·材料与方法 | 第23-27页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第23-26页 |
| ·化学试剂 | 第23页 |
| ·生物试剂 | 第23-24页 |
| ·培养基配方 | 第24页 |
| ·克隆用缓冲液 | 第24-25页 |
| ·菌种与质粒 | 第25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-27页 |
| ·大肠杆菌的培养 | 第26页 |
| ·菌种保藏 | 第26页 |
| ·提取大肠杆菌基因组 | 第26页 |
| ·DNA的琼脂糖电泳 | 第26页 |
| ·凝胶回收 | 第26页 |
| ·高效感受态细胞制备试剂盒制备感受态细胞 | 第26-27页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第27页 |
| ·碱裂解法制备质粒 | 第27页 |
| ·DNA的酶切 | 第27页 |
| ·DNA的连接 | 第27页 |
| ·结果与讨论 | 第27-30页 |
| ·PCR引物设计 | 第28页 |
| ·lacZ基因PCR扩增 | 第28页 |
| ·克隆载体的构建 | 第28-29页 |
| ·表达载体的构建 | 第29-30页 |
| ·小结 | 第30-31页 |
| 第3章 β-半乳糖苷酶的诱导表达与活性分析 | 第31-41页 |
| ·材料和方法 | 第31-35页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第31-34页 |
| ·化学试剂 | 第31-32页 |
| ·缓冲液 | 第32-33页 |
| ·SDS-PAGE所用试剂 | 第33页 |
| ·凝胶的配制 | 第33-34页 |
| ·主要仪器 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-35页 |
| ·重组菌诱导表达 | 第34页 |
| ·目的蛋白的SDS-PAGE分析 | 第34页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第34-35页 |
| ·以ONPG为底物测定乳糖酶的活力 | 第35页 |
| ·β-半乳糖苷酶的酶学性质的研究 | 第35页 |
| ·结果与讨论 | 第35-40页 |
| ·β-半乳糖苷酶的诱导表达 | 第35-36页 |
| ·β-半乳糖苷酶的酶活标准曲线 | 第36-37页 |
| ·β-半乳糖苷酶的活力测定 | 第37-38页 |
| ·β-半乳糖苷酶的最适酶活测定 | 第38-40页 |
| ·温度对酶活的影响 | 第38-39页 |
| ·pH对酶活的影响 | 第39页 |
| ·各种金属离子对酶活的影响 | 第39-40页 |
| ·小结 | 第40-41页 |
| 第4章 酶法生产D-半乳糖的研究 | 第41-45页 |
| ·材料和方法 | 第41页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第41页 |
| ·化学试剂 | 第41页 |
| ·反应缓冲液 | 第41页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| ·乳糖水解率的测定方法 | 第41页 |
| ·结果与讨论 | 第41-44页 |
| ·水解反应时间对乳糖水解率的影响 | 第41-42页 |
| ·酶量对乳糖水解率的影响 | 第42页 |
| ·底物浓度对乳糖水解率的影响 | 第42-43页 |
| ·pH对乳糖水解率的影响 | 第43页 |
| ·温度对乳糖水解率的影响 | 第43-44页 |
| ·小结 | 第44-45页 |
| 第5章 联合β-半乳糖苷酶和L-阿拉伯糖异构酶基因的重组表达与D-塔格糖的转化研究 | 第45-56页 |
| ·材料与方法 | 第45-47页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第46页 |
| ·化学试剂 | 第46页 |
| ·反应缓冲液 | 第46页 |
| ·主要仪器 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-47页 |
| ·araA和lacZ基因克隆重组 | 第46页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第46页 |
| ·半胱氨酸-咔唑法测定D-塔格糖的含量 | 第46页 |
| ·D-塔格糖的转化反应 | 第46页 |
| ·酶源类型对D-塔格糖产量的影响 | 第46-47页 |
| ·底物浓度对D-塔格糖产量的影响 | 第47页 |
| ·反应温度对D-塔格糖产量的影响 | 第47页 |
| ·体系pH对D-塔格糖产量的影响 | 第47页 |
| ·金属离子对D-塔格糖产量的影响 | 第47页 |
| ·结果与讨论 | 第47-55页 |
| ·PCR引物设计 | 第47-48页 |
| ·PCR扩增 | 第48页 |
| ·构建表达载体 | 第48页 |
| ·目的基因的诱导表达及SDS-PAGE检测 | 第48-49页 |
| ·串联重组质粒菌株的诱导表达 | 第49-50页 |
| ·D-塔格糖的转化反应 | 第50-55页 |
| ·D-塔格糖的标准曲线 | 第50-51页 |
| ·不同酶源对D-塔格糖转化率的影响 | 第51页 |
| ·温度 | 第51-52页 |
| ·pH | 第52-53页 |
| ·底物浓度 | 第53-54页 |
| ·金属离子 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-56页 |
| 第6章 结论与展望 | 第56-57页 |
| ·结论 | 第56页 |
| ·展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 致谢 | 第61页 |